Усиление биогенеза лизосом при воздействии доксорубицина на клетки HCT116 в условиях нормоксии

Аннотация

Гидрофобные слабоосновные препараты, такие как доксорубицин и сунитиниб, являются в настоящее время важными компонентами химиотерапии опухолевых заболеваний. Показано, что ряд таких соединений индуцирует увеличение общего объёма лизосом в опухолевых клетках. Известно также, что гипоксия, характерная для опухолевых клеток in vivo, приводит к химиорезистентности за счёт изоляции доксорубицина в лизосомах. Для усиления эффективности химиотерапии предлагаются разные подходы, в том числе направленные на дисрегуляцию лизосом. Признаётся, что блок аутофагии часто является способом снижения химиорезистентности. Необходимо показать, существует ли, наоборот, влияние доксорубицина на физиологию лизосом. В настоящей работе на клетках карциномы толстой кишки HCT116 показано, что доксорубицин локализуется в значительной степени в лизосомах даже при нормоксии. При нормоксии доксорубицин вызывает увеличение суммарного объёма лизосом, тогда как в условиях дефицита кислорода подобный эффект слабее. Совместное применение доксорубицина и хлорохина, широко известного лизосомотропного препарата, приводит к увеличению объёма лизосом как в нормоксии, так и в гипоксии. В условиях нормоксии доксорубицин активирует фактор биогенеза лизосом TFEB, что может объяснять увеличение суммарного объёма данных органелл. Также показана функциональная активность лизосом в присутствии доксорубицина. Эффект увеличения лизосом и усиления их деградационной активности в присутствии доксорубицина также показан для линии фибросаркомы HT1080. Суммируя, впервые показано влияние доксорубицина на параметры лизосом в разных кислородных условиях на моделях опухолевых клеточных линий.

Сноски

* Адресат для корреспонденции.

Дополнительные материалы

Приложение

Вклад авторов

Н.С. Ильинский, В.И. Горделий – концепция и руководство работой; Н.С. Ильинский, В.А. Алехин, С.Ф. Назарова, В.В. Павлов – проведение экспериментов, обработка результатов; Н.С. Ильинский, А.С. Тихомиров, О.В. Моисеева – обсуждение результатов исследования; Н.С. Ильинский и В.А. Алехин – написание текста; все соавторы – редактирование текста статьи.

Финансирование

Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда № 24-24-00504, https://rscf.ru/project/24-24-00504/.

Благодарности

Мы благодарим лабораторию Westlake, Ханчжоу, за предоставление плазмид (WeKwikGene P18466). Мы благодарим Михаила Юрьевича Высоких (МГУ) за возможность экспериментов с монодансилкадаверином (MDC).

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Соблюдение этических норм

Настоящая статья не содержит описания каких-либо исследований с участием людей или животных в качестве объектов.

Список литературы

1. Gotink, K. J., Broxterman, H. J., Labots, M., De Haas, R. R., Dekker, H., Honeywell, R. J., Rudek, M. A., Beerepoot, L. V., Musters, R. J., Jansen, G., Griffioen, A. W., Assaraf, Y. G., Pili, R., Peters, G. J., and Verheul, H. M. W. (2011) Lysosomal sequestration of sunitinib: a novel mechanism of drug resistance, Clin. Cancer Res., 17, 7337-7346, https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-11-1667.

2. Sun, J., Qi, S., Chen, Q., Liu, K., Liu, H., Zheng, H., Sun, B., and Lou, H. (2025) Design, synthesis, and biological evaluation of marchantin C-NO donor hybrids for overcoming Pgp-mediated drug resistance by targeting lysosome, J. Med. Chem., 68, 5503-5528, https://doi.org/10.1021/acs.jmedchem.4c02733.

3. Hurwitz, S. J., Terashima, M., Mizunuma, N., and Slapak, C. A. (1997) Vesicular anthracycline accumulation in doxorubicin-selected U-937 cells: participation of lysosomes, Blood, 89, 3745-3754, https://doi.org/10.1182/blood.v89.10.3745.

4. Adar, Y., Stark, M., Bram, E. E., Nowak-Sliwinska, P., Van Den Bergh, H., Szewczyk, G., Sarna, T., Skladanowski, A., Griffioen, A. W., and Assaraf, Y. G. (2012) Imidazoacridinone-dependent lysosomal photodestruction: a pharmacological Trojan horse approach to eradicate multidrug-resistant cancers, Cell Death Dis., 3, e293, https://doi.org/10.1038/cddis.2012.30.

5. Zhitomirsky, B., and Assaraf, Y. G. (2015) Lysosomal sequestration of hydrophobic weak base chemotherapeutics triggers lysosomal biogenesis and lysosome dependent cancer multidrug resistance, Oncotarget, 6, 1143-1156, https://doi.org/10.18632/oncotarget.2732.

6. Щекотихин А.Е., Олсуфьева Е.Н., Янковская В.С. (2022) Антибиотики и родственные соединения, Лаборатория знаний, Москва.

7. Brown, J. M., and Wilson, W. R. (2004) Exploiting tumour hypoxia in cancer treatment, Nat. Rev. Cancer, 4, 437-447, https://doi.org/10.1038/nrc1367.

8. Tacar, O., Sriamornsak, P., and Dass, C. R. (2013) Doxorubicin: an update on anticancer molecular action, toxicity and novel drug delivery systems, J. Pharm. Pharmacol., 65, 157-170, https://doi.org/10.1111/j.2042-7158.2012.01567.x.

9. Sangweni, N. F., Gabuza, K., Huisamen, B., Mabasa, L., van Vuuren, D., and Johnson, R. (2022) Molecular insights into the pathophysiology of doxorubicin-induced cardiotoxicity: a graphical representation, Arch. Toxicol., 96, 1541-1550, https://doi.org/10.1007/s00204-022-03262-w.

10. Guo, B., Tam, A., Santi, S. A., and Parissenti, A. M. (2016) Role of autophagy and lysosomal drug sequestration in acquired resistance to doxorubicin in MCF-7 cells, BMC Cancer, 16, 762, https://doi.org/10.1186/s12885-016-2790-3.

11. Settembre, C., Di Malta, C., Polito, V. A., Arencibia, M. G., Vetrini, F., Erdin, S., Erdin, S. U., Huynh, T., Medina, D., Colella, P., Sardiello, M., Rubinsztein, D. C., and Ballabio, A. (2011) TFEB links autophagy to lysosomal biogenesis, Science, 332, 1429-1433, https://doi.org/10.1126/science.1204592.

12. Ilyinsky, N. S., Nesterov, S. V., Shestoperova, E. I., Fonin, A. V., Uversky, V. N., and Gordeliy, V. I. (2021) On the role of normal aging processes in the onset and pathogenesis of diseases associated with the abnormal accumulation of protein aggregates, Biochemistry (Moscow), 86, 275-289, https://doi.org/10.1134/S0006297921030056.

13. Riera, C. E., and Dillin, A. (2015) Tipping the metabolic scales towards increased longevity in mammals, Nat. Cell Biol., 17, 196-203, https://doi.org/10.1038/ncb3107.

14. Manyilov, V. D., Ilyinsky, N. S., Nesterov, S. V., Saqr, B. M. G. A., Dayhoff, G. W., Zinovev, E. V., Matrenok, S. S., Fonin, A. V., Kuznetsova, I. M., Turoverov, K. K., Ivanovich, V., and Uversky, V. N. (2023) Chaotic aging: intrinsically disordered proteins in aging-related processes, Cell. Mol. Life Sci., 80, 269, https://doi.org/10.1007/s00018-023-04897-3.

15. Sardiello, M., Palmieri, M., di Ronza, A., Medina, D. L., Valenza, M., Gennarino, V. A., Di Malta, C., Donaudy, F., Embrione, V., Polishchuk, R. S., Banfi, S., Parenti, G., Cattaneo, E., and Ballabio, A. (2009) A gene network regulating lysosomal biogenesis and function, Science, 325, 473-477, https://doi.org/10.1126/science.1174447.

16. Palmieri, M., Impey, S., Kang, H., Ronza, A., Pelz, C., and Sardiello, M. (2011) Characterization of the CLEAR network reveals an integrated control of cellular clearance pathways, Hum. Mol. Genet., 20, 3852-3866, https://doi.org/10.1093/hmg/ddr306.

17. Settembre, C., Zoncu, R., Medina, D. L., Vetrini, F., Erdin, S., Erdin, S., Huynh, T., Ferron, M., Karsenty, G., Vellard, M. C., Facchinetti, V., Sabatini, D. M., and Ballabio, A. (2012) A lysosome-to-nucleus signalling mechanism senses and regulates the lysosome via mTOR and TFEB, EMBO J., 31, 1095-1108, https://doi.org/10.1038/emboj.2012.32.

18. Wang, C., Niederstrasser, H., Douglas, P. M., Lin, R., Jaramillo, J., Li, Y., Olswald, N. W., Zhou, A., McMillan, E. A., Mendiratta, S., Wang, Z., Zhao, T., Lin, Z., Luo, M., Huang, G., Brekken, R. A., Posner, B. A., MacMillan, J. B., Gao, J., and White, M. A. (2017) Small-molecule TFEB pathway agonists that ameliorate metabolic syndrome in mice and extend C. elegans lifespan, Nat. Commun., 8, 2270, https://doi.org/10.1038/s41467-017-02332-3.

19. Alekhin, V. A., Nazarova, S. F., Gizatullina, D. R., Lopatina, E. T., Kirpichnikov, M. P., Ostrovsky, M. A., Gordeliy, V. I., and Ilyinsky, N. S. (2025) Lysosome functioning as a process that slows down aging, Biochem. Suppl. Ser. A Membr. Cell Biol., 19, 3-11, https://doi.org/10.1134/S1990747824700387.

20. Moruno Manchon, J. F., Uzor, N. E., Kesler, S. R., Wefel, J. S., Townley, D. M., Nagaraja, A. S., Pradeep, S., Mangala, L. S., Sood, A. K., and Tsvetkov, A. S. (2016) TFEB ameliorates the impairment of the autophagy-lysosome pathway in neurons induced by doxorubicin, Aging (Albany NY), 8, 3507-3519, https://doi.org/10.18632/aging.101144.

21. Li, D. L., Wang, Z. V., Ding, G., Tan, W., Luo, X., Criollo, A., Xie, M., Jiang, N., May, H., Kyrychenko, V., Schneider, J. W., Gillette, T. G., and Hill, J. A. (2016) Doxorubicin blocks cardiomyocyte autophagic flux by inhibiting lysosome acidification, Circulation, 133, 1668-1687, https://doi.org/10.1161/CIRCULATIONAHA.115.017443.

22. Li, Y., Sun, Y., Jing, L., Wang, J., Yan, Y., Feng, Y., Zhang, Y., Liu, Z., Ma, L., and DIao, A. (2017) Lysosome inhibitors enhance the chemotherapeutic activity of doxorubicin in HepG2 cells, Chemotherapy, 62, 85-93, https://doi.org/10.1159/000448802.

23. Chen, C., Lu, L., Yan, S., Yi, H., Yao, H., Wu, D., He, G., Tao, X., and Deng, X. (2018) Autophagy and doxorubicin resistance in cancer, Anticancer. Drugs, 29, 1-9, https://doi.org/10.1097/CAD.0000000000000572.

24. Huang, J., Ni, J., Liu, K., Yu, Y., Xie, M., Kang, R., and Vernon, P. (2012) HMGB1 promotes drug resistance in osteosarcoma, Cancer Res., 72, 230-238, https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-11-2001.

25. Lucien, F., Pelletier, P. P., Lavoie, R. R., Lacroix, J. M., Roy, S., Parent, J. L., Arsenault, D., Harper, K., and Dubois, C. M. (2017) Hypoxia-induced mobilization of NHE6 to the plasma membrane triggers endosome hyperacidification and chemoresistance, Nat. Commun., 8, 15884, https://doi.org/10.1038/ncomms15884.

26. Lai, M., Chang, C., and Sun, H. S. (2016) Hypoxia induces autophagy through translational up-regulation of lysosomal proteins in human colon cancer cells, PLoS One, 11, e0153627, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0153627.

27. Persiyantseva, N. A., Ivanova, E. S., and Zamkova, M. A. (2025) Role of autophagy in the mechanisms of chemoresistance of tumor cells induced by the use of anthracycline antibiotics, Biochemistry (Moscow), 90, 985-999, https://doi.org/10.1134/S0006297925601005.

28. Al-Bari, A. A. (2014) Chloroquine analogues in drug discovery: new directions of uses, mechanisms of actions and toxic manifestations from malaria to multifarious diseases, J. Antimicrob. Chemother., 70, 1608-1621, https://doi.org/10.1093/jac/dkv018.

29. Seebacher, N. A., Richardson, D. R., and Jansson, P. J. (2016) A mechanism for overcoming P-glycoprotein-mediated drug resistance: novel combination therapy that releases stored doxorubicin from lysosomes via lysosomal permeabilization using Dp44mT or DpC, Cell Death Dis., 7, e2510, https://doi.org/10.1038/cddis.2016.381.

30. Ilyinsky, N. S., Bukhalovich, S. M., Bagaeva, D. F., Alekseev, A. A., Nesterov, S. V., Tsybrov, F. M., Bogorodskiy, A. O., Nazarova, S. F., Alekhin, V. A., Moiseeva, O. V., Vlasova, A. D., Kovalev, K. V., Mikhailov, A. E., Rogachev, A. V., Bamberg, E., Borshchevskiy, V. I., and Gordeliy, V. I. (2023) Optogenetic control of lysosome function, bioRxiv, https://doi.org/10.1101/2023.08.02.551716.

31. Zeng, W., Li, C., Wu, R., Yang, X., Wang, Q., Lin, B., Wei, Y., Li, H., Shan, G., Qu, L., and Cang, C. (2024) Optogenetic manipulation of lysosomal physiology and autophagy-dependent clearance of amyloid beta, PLoS Biol., 22, e3002591, https://doi.org/10.1371/journal.pbio.3002591.

32. Ильинский Н.С., Бухалович С.М., Горделий В.И., Цыбров Ф.М., Алексеев А.А., Нестеров С.В., Богородский А.О., Багаева Д.Ф., Борщевский В.И., Власова А.Д., Рогачёв А.В., Михайлов А.Э. (2023) Конструкция генетическая для экспрессии в лизосомах клеток млекопитающих родопсина NsXeR из организма наногалоархеон Nanosalina, позволяющего повышать pH лизосом, 1-15, номер патента: 2820973.

33. Okhrimenko, I. S., Kovalev, K., Petrovskaya, L. E., Ilyinsky, N. S., Alekseev, A. A., Marin, E., Rokitskaya, T. I., Antonenko, Y. N., Siletsky, S. A., Popov, P. A., Zagryadskaya, Y. A., Soloviov, D. V., Chizhov, I. V., Zabelskii, D. V., Ryzhykau, Y. L., Vlasov, A. V., Kuklin, A. I., Bogorodskiy, A. O., Mikhailov, A. E., Sidorov, D. V., Bukhalovich, S., Tsybrov, F., Bukhdruker, S., Vlasova, A. D., Borshchevskiy, V. I., Dolgikh, D. A., Kirpichnikov, M. P., Bamberg, E., and Gordeliy, V. I. (2023) Mirror proteorhodopsins, Commun. Chem., 6, 88, https://doi.org/10.1038/s42004-023-00884-8.

34. Gordeliy, V. I. (2022) Rhodopsin: Methods and Protocols, Methods in molecular biology, vol. 2501, Humana Press, New York, NY, https://doi.org/10.1007/978-1-0716-2329-9.

35. Bogorodskiy, A., Okhrimenko, I. S., Maslov, I., Maliar, N., Burkatovskiy, D., Von Ameln, F., Schulga, A., Jakobs, P., Altschmied, J., Haendeler, J., Katranidis, A., Sorokin, I., Mishin, A., Gordeliy, V., Büldt, G., Voos, W., Gensch, T., and Borshchevskiy, V. I. (2021) Accessing mitochondrial protein import in living cells by protein microinjection, Front. Cell Dev. Biol., 9, 698658, https://doi.org/10.3389/fcell.2021.698658.

36. Stringer, C., Wang, T., Michaelos, M., and Pachitariu, M. (2021) Cellpose: a generalist algorithm for cellular segmentation, Nat. Methods, 18, 100-106, https://doi.org/10.1038/s41592-020-01018-x.

37. Van de Vyver, T., Bogaert, B., De Backer, L., Joris, F., Guagliardo, R., Van Hoeck, J., Merckx, P., Van Calenbergh, S., Ramishetti, S., Peer, D., Remaut, K., De Smedt, S. C., and Raemdonck, K. (2020) Cationic amphiphilic drugs boost the lysosomal escape of small nucleic acid therapeutics in a nanocarrier-dependent manner, ACS Nano, 14, 4774-4791, https://doi.org/10.1021/acsnano.0c00666.

38. Cui, Y., Carosi, J. M., Yang, Z., Ariotti, N., Kerr, M. C., Parton, R. G., Sargeant, T. J., and Teasdale, R. D. (2019) Retromer has a selective function in cargo sorting via endosome transport carriers, J. Cell Biol., 218, 615-631, https://doi.org/10.1083/jcb.201806153.

39. Virtanen, P., Gommers, R., Oliphant, T. E., Haberland, M., Reddy, T., Cournapeau, D., Burovski, E., Peterson, P., Weckesser, W., and Bright, J. (2020) SciPy 1.0: fundamental algorithms for scientific computing in Python, Nat. Methods, 17, 261-272, https://doi.org/10.1038/s41592-019-0686-2.

40. Tikhomirov, A. S., Sinkevich, Y. B., Dezhenkova, L. G., Kaluzhny, D. N., Ilyinsky, N. S., Borshchevskiy, V. I., Schols, D., and Shchekotikhin, A. E. (2024) Synthesis and antitumor activity of cyclopentane-fused anthraquinone derivatives, Eur. J. Med. Chem., 265, 116103, https://doi.org/10.1016/j.ejmech.2023.116103.

41. Neto, Í., Rocha, J., Gaspar, M. M., and Reis, C. P. (2023) Experimental murine models for colorectal cancer research, Cancers (Basel), 15, 2570, https://doi.org/10.3390/cancers15092570.

42. Torrance, C. J., Agrawal, V., Vogelstein, B., and Kinzler, K. W. (2001) Use of isogenic human cancer cells for high- throughput screening and drug discovery, Nat. Biotechnol., 19, 940-945, https://doi.org/10.1038/nbt1001-940.

43. Clarke, P. A., Roe, T., Swabey, K., Hobbs, S. M., Mcandrew, C., Tomlin, K., Westwood, I., Burke, R., van Montfort, R., and Workman, P. (2019) Dissecting mechanisms of resistance to targeted drug combination therapy in human colorectal cancer, Oncogene, 38, 5076-5090, https://doi.org/10.1038/s41388-019-0780-z.

44. Liu, X., Fang, J., Huang, S., Wu, X., and Xie, X. (2021) Tumor-on-a-chip: from bioinspired design to biomedical application, Microsystems Nanoeng., 7, 50, https://doi.org/10.1038/s41378-021-00277-8.

45. Freeman, S. A., Grinstein, S., and Orlowski, J. (2023) Determinants, maintenance, and function of organellar pH, Physiol. Rev., 103, 515-606, https://doi.org/10.1152/physrev.00009.2022.

46. Karukstis, K. K., Thompson, E. H., Whiles, J. A., and Rosenfeld, R. J. (1998) Deciphering the fluorescence signature of daunomycin and doxorubicin, Biophys. Chem., 73, 249-263, https://doi.org/10.1016/s0301-4622(98)00150-1.

47. Kumar, P., Nagarajan, A., and Uchil, P. D. (2018) Analysis of cell viability by the MTT assay, Cold Spring Harb. Protoc., 2018, 469-471, https://doi.org/10.1101/pdb.prot095505.

48. Schonewolf, C. A., Mehta, M., Schiff, D., Wu, H., Haffty, B. G., Karantza, V., and Salma, K. (2014) Autophagy inhibition by chloroquine sensitizes HT-29 colorectal cancer cells to concurrent chemoradiation, World J. Gastrointest. Oncol., 6, 74-82, https://doi.org/10.4251/wjgo.v6.i3.74.

49. Mauthe, M., Orhon, I., Rocchi, C., Zhou, X., Luhr, M., Hijlkema, K. J., Coppes, R. P., Engedal, N., Mari, M., and Reggiori, F. (2018) Chloroquine inhibits autophagic flux by decreasing autophagosome-lysosome fusion, Autophagy, 14, 1435-1455, https://doi.org/10.1080/15548627.2018.1474314.

50. Sakurai, M., and Kuwahara, T. (2021) Two methods to analyze LRRK2 functions under lysosomal stress: the measurements of cathepsin release and lysosomal enlargement, in Experimental Models of Parkinson’s Disease, Springer, pp. 63-72, https://doi.org/10.1007/978-1-0716-1495-2_7.

51. Fan, C., Wang, W., Zhao, B., Zhang, S., and Miao, J. (2006) Chloroquine inhibits cell growth and induces cell death in A549 lung cancer cells, Bioorg. Med. Chem., 14, 3218-3222, https://doi.org/10.1016/j.bmc.2005.12.035.

52. Ponsford, A. H., Ryan, T. A., Raimondi, A., Cocucci, E., Wycislo, S. A., Fröhlich, F., Swan, L. E., and Stagi, M. (2021) Live imaging of intra-lysosome pH in cell lines and primary neuronal culture using a novel genetically encoded biosensor, Autophagy, 17, 1500-1518, https://doi.org/10.1080/15548627.2020.1771858.

53. Chikte, S., Panchal, N., and Warnes, G. (2014) Use of LysoTracker dyes: a flow cytometric study of autophagy, Cytometry A, 85, 169-178, https://doi.org/10.1002/cyto.22312.

54. Maes, H., Kuchnio, A., Peric, A., Moens, S., Nys, K., Bock, K. D., Quaegebeur, A., Schoors, S., Georgiadou, M., Wouters, J., Vinckier, S., Radtke, F., Boulanger, C., Vankelecom, H., Garmyn, M., Annaert, W., and Agostinis, P. (2014) Tumor vessel normalization by chloroquine independent of autophagy, Cancer Cell, 26, 190-206, https://doi.org/10.1016/j.ccr.2014.06.025.

55. Chen, D., Xie, J., Fiskesund, R., Dong, W., Liang, X., Lv, J., Jin, X., Liu, J., Mo, S., Zhang, T., Cheng, F., Zhou, Y., Zhang, H., Tang, K., Ma, J., Liu, Y., and Huang, B. (2018) Chloroquine modulates antitumor immune response by resetting tumor-associated macrophages toward M1 phenotype, Nat. Commun., 9, 873, https://doi.org/10.1038/s41467-018-03225-9.

56. Bonam, S. R., Wang, F., and Muller, S. (2019) Lysosomes as a therapeutic target, Nat. Rev. Drug Discov., 18, 923-948, https://doi.org/10.1038/s41573-019-0036-1.

57. Vruchte, D., Speak, A. O., Wallom, K. L., Eisa, N. A., Smith, D. A., Hendriksz, C. J., Simmons, L., Lachmann, R. H., Cousins, A., Hartung, R., Mengel, E., Runz, H., Beck, M., Amraoui, Y., Imrie, J., Jacklin, E., Riddick, K., Yanjanin, N. M., Wassif, C. A., Rolfs, A., Rimmele, F., Wright, N., Taylor, C., Ramaswami, U., Cox, T. M., Hastings, C., Cortina-borja, M., and Platt, F. M. (2014) Relative acidic compartment volume as a lysosomal storage disorder–associated biomarker, J. Clin. Invest., 124, 1320-1328, https://doi.org/10.1172/JCI72835.

58. Annunziata, I., van de Vlekkert, D., Wolf, E., Finkelstein, D., Neale, G., Machado, E., Mosca, R., Campos, Y., Tillman, H., Roussel, M. F., Weesner, J. A., Fremuth, L. E., Qiu, X., Han, M., Grosveld, G. C., and Azzo, A. (2019) MYC competes with MiT/TFE in regulating lysosomal biogenesis and autophagy through an epigenetic rheostat, Nat. Commun., 10, 3623, https://doi.org/10.1038/s41467-019-11568-0.

59. Shapiro, H. M. (2005) Practical flow cytometry, John Wiley & Sons, https://doi.org/10.1002/0471722731.

60. Puchalski, R. B., and Fah, W. E. (1992) Gene transfer by electroporation, lipofection, and DEAE-dextran transfection: compatibility with cell-sorting by flow cytometry, Cytometry, 13, 23-30, https://doi.org/10.1002/cyto.990130106.

61. Klionsky, D. J., Abdel-Aziz, A. K., Abdelfatah, S., Abdellatif, M., Abdoli, A., Abel, S., Abeliovich, H., Abildgaard, M. H., Abudu, Y. P., Acevedo-Arozena, A., Adamopoulos, I. E., Adeli, K., Adolph, T. E., Adornetto, A., Aflaki, E., Agam, G., Agarwal, A., Aggarwal, B. B., Agnello, M., et al. (2021) Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition), Autophagy, 17, 1-382, https://doi.org/10.1080/15548627.2020.1797280.

62. Bernardini, N., Giannessi, F., Bianchi, F., Dolfi, A., Lupetti, M., Zaccaro, L., Malvaldi, G., and Del Tacca, M. (1991) Comparative activity of doxorubicin and its major metabolite, doxorubicinol, on V79/AP4 fibroblasts: a morphofunctional study, Exp. Mol. Pathol., 55, 238-250, https://doi.org/10.1016/0014-4800(91)90004-h.

63. Wang, Y., Rieschick, P., Romero-Fernandez, W., and Appelbaum, N. (2024) Phospholipase D3 regulates TFEB/TFE3 metabolism to maintain lysosomal homeostasis, bioRxiv, https://doi.org/10.1101/2024.09.26.615214.

64. Carson, J. M., Okamura, K., Wakashin, H., Mcfann, K., Dobrinskikh, E., Kopp, J. B., and Blaine, J. (2014) Podocytes degrade endocytosed albumin primarily in lysosomes, PLoS One, 9, e99771, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0099771.

65. Fedele, A. O., and Proud, C. G. (2020) Chloroquine and bafilomycin A mimic lysosomal storage disorders and impair mTORC1 signalling, Biosci. Rep., 40, BSR20200905, https://doi.org/10.1042/BSR20200905.

66. Munafó, D. B., and Colombo, M. I. (2001) A novel assay to study autophagy: regulation of autophagosome vacuole size by amino acid deprivation, J. Cell Sci., 114, 3619-3629, https://doi.org/10.1242/jcs.114.20.3619.

67. Iwai-Kanai, E., Yuan, H., Huang, C., Sayen, M. R., Cynthia, N., Kim, L., Gottlieb, R. A., Yuan, H., Huang, C., Sayen, M. R., and Cynthia, N. (2008) A method to measure cardiac autophagic flux in vivo, Autophagy, 4, 322-329, https://doi.org/10.4161/auto.5603.

68. Кобляков В.А. (2019) Механизмы регуляции онкобелками аэробного гликолиза (эффект Варбурга) в процессе канцерогенеза, Биохимия, 84, 1371-1384, https://doi.org/10.1134/S0320972519100014.

69. Gallagher, L. E., Radhi, O. A., Abdullah, M. O., Mccluskey, A. G., Boyd, M., and Chan, E. Y. W. (2017) Lysosomotropism depends on glucose: a chloroquine resistance mechanism, Cell Death Dis., 8, e3014, https://doi.org/10.1038/cddis.2017.416.

70. Duan, Y., Huang, P., Sun, L., Wang, P., Cai, Y., Shi, T., Li, Y., Zhou, Y., and Yu, S. (2024) Dehydroandrographolide ameliorates doxorubicin-mediated cardiotoxicity by regulating autophagy through the mTOR-TFEB pathway, Chem. Biol. Interact., 399, 111132, https://doi.org/10.1016/j.cbi.2024.111132.

71. Iglesias-Corral, D., Garc, P., and Ruiz-Robles, J. M. (2024) Chloroquine-induced DNA damage synergizes with DNA repair inhibitors causing cancer cell death, Front. Oncol., 14, 1390518, https://doi.org/10.3389/fonc.2024.1390518.