БИОХИМИЯ, 2018, том 83, вып. 2, с. 199–211
УДК 577.2.08
Метод эффективного выделения митохондрий высокой чистоты для «омиксных» исследований*,**
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук, 119991 Москва, Россия; электронная почта: ama@eimb.ru
2 Научно-исследовательский институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Россия
3 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича», 119121 Москва, Россия
4 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Московский физико-технический институт (государственный университет)», 141701 Долгопрудный, Московская область, Россия
Поступила в редакцию 13.10.2017
После доработки 27.10.2017
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: выделение митохондрий, протеомные исследования, двумерный гель-электрофорез.
Аннотация
Ультрацентрифугирование в градиенте плотности остается самым надежным способом получения высокоочищенных препаратов митохондрий. Однако не всегда у исследователя есть необходимое оборудование, кроме того данный метод обладает невысоким выходом, что может иметь критическое значение, когда исходный биологический материал весьма скуден. В данной работе описан комбинированный метод выделения митохондрий для протеомных исследований, объединяющий разрушение клеток ультразвуком, дифференциальное центрифугирование и магнитную сепарацию. Метод позволяет добиться очень высокого обогащения препарата митохондриальными белками, значительно превышающего таковое при использовании дифференциального центрифугирования, магнитной сепарации или их комбинации, и дает самое эффективное устранение цитоплазматических компонентов, что показано с помощью двумерного гель-электрофореза, масс-спектрометрии и Вестерн-блоттинга. Кроме того, наш метод вдвое повышает выход митохондрий, однако он не должен использоваться в функциональных исследованиях этих органелл, так как большинство выделяемых митохондрий имеют нарушенную структуру, что показано методом электронной микроскопии.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow) http://protein.bio.msu.ru/biokhimiya, в рубрике «Papers in Press», BM17-461, 27.11.2017.
** Приложение к статье на английском языке опубликовано на сайте журнала «Biochemistry» (Moscow) и на сайте издательства Springer (Link.springer.com), том 83, вып. 1, 2018.
*** Адресат для корреспонденции.