Влияние точечной мутации в константном домене белка Бенс-Джонса BIF на его агрегационные свойства^*

Аннотация

Миеломная нефропатия возникает за счет образования моноклональными легкими цепями иммуноглобулинов (белками Бенс-Джонса) различных агрегатов в почках больных множественной миеломой (ММ). Механизм образования амилоидных отложений до сих пор не выяснен. Ранее ключевую роль в формировании фибрилл отводили вариабельным доменам, которые благодаря соматическим мутациям проявляли амилоидогенные свойства. Однако был обнаружен белок Бенс-Джонса BIF, в котором образование фибрилл происходит за счет константного домена. Выявленная в аминокислотной последовательности константного домена BIF замена Ser177 на Asn, вероятнее всего, обусловлена наследственным фактором, а не соматической мутацией. Для исследования роли этой мутации в амилоидогенезе был выделен рекомбинантный белок Бенс-Джонса BIF и его аналог N177S, содержащий в 177 позиции Ser, что характерно для известных Km¹, Km^1,2 и Km³ аллотипов κ-цепей иммуноглобулинов. Методом атомно-силовой микроскопии (АСМ) был проведен анализ морфологии агрегатов, образованных этими белками в условиях, отражающих условия во время транспортировки белка в кровотоке и его фильтрации в почечные клубочки, микроокружение в дистальных канальцах и условия в проксимальных почечных канальцах. Было показано, что характер агрегатов, образуемых белками BIF и N177S в течение 14 сут при 37 °С, сильно отличался и зависел как от pH, так и от присутствия восстановителей дисульфидных связей. Для белка BIF образование фибрилл наблюдалось при pH 7,2, 6,5 и 10,1, в то время как для N177S фибриллы были обнаружены только в условиях щелочных pH (10,1). Рефолдинг обоих белков в присутствии 5 мМ дитиотреитола приводил к формированию разветвленных структур.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: