БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 12, с. 1907–1916
УДК 577.112.083
Гетерологичная экспрессия и выделение белка ядерного экспорта NEP вируса гриппа А
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: вирус гриппа А, белок ядерного экспорта NEP, аффинная хроматография, агрегация белков.
Аннотация
Белок ядерного экспорта NEP (NS2, 14,4 кДа) вируса гриппа А играет важную роль на различных этапах развития вирусной инфекции. Для проведения всесторонних исследований структуры и функции NEP необходимо располагать высокочистыми препаратами белка. В данной работе получена серия плазмидных конструкций с геном NEP под контролем конститутивного промотора trp, позволяющих с высокой эффективностью экспрессировать белок NEP в клетках Escherichia coli. Разработан эффективный метод извлечения белка из телец включения на основе солюбилизации раствором додецилсульфата натрия. С использованием хроматографии на Ni-агарозе получены чистые препараты белка, несущие (His)6-модули на N– или С-конце, с выходом более 20 мг на литр культуры. Методом КД продемонстрировано соответствие вторичной структуры полученных препаратов структуре природного белка NEP. Выявлена высокая склонность белка к агрегации в широком диапазоне условий.