Рекомбинантный эритропоэтин человека с процессируемыми дополнительными белковыми доменами: очистка белка, синтезированного в гетерологичной системе экспрессии в Escherichia coli

© 2017 Т.М. Грунина, А.В. Демиденко, А.М. Лящук, М.С. Попонова, З.М. Галушкина, Л.А. Соболева, С.А. Черепушкин, Н.Б. Поляков, Д.А. Грумов, А.И. Соловьев, В.Г. Жуховицкий, И.С. Бокша, М.Е. Субботина, А.В. Громов, В.Г. Лунин, А.С. Карягина

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: эритропоэтин, гетерологичная экспрессия, Escherichia coli.

Аннотация

Синтезом в гетерологичной системе экспрессии в Escherichia coli получены три варианта рекомбинантного эритропоэтина человека (rhEPO), несущие на N-концах дополнительные белковые домены: 1) мальтозосвязывающий белок (MBP), 2) MBP с шестью остатками гистидина (6His) в N-концевом положении, 3) s-tag (15-звенный олигопептид из рибонуклеазы А поджелудочной железы быка) также с 6His на N-конце. Оба варианта белка, содержащие MBP, характеризовались склонностью к агрегации в неденатурирующих условиях, а после специфического отщепления MBP энтерокиназой оказалось невозможным разработать процедуру разделения эритропоэтина и отщепленного домена. В случае химерного белка 6His-s-tag-EPO удалось разделить продукты протеолиза энтерокиназой с помощью колоночной хроматографии, и был получен rhEPO без дополнительных белковых доменов. MALDI-TOF-масс-спектрометрический анализ показал, что химерный белок 6His-s-tag-EPO после проведения рефолдинга формирует структуру, близкую к нативной, с двумя дисульфидными связями. Как 6His-s-tag-EPO, так и очищенный после протеолитического гидролиза rhEPO без дополнительных доменов обладали одинаковой биологической активностью in vitro на культуре клеток.

Аннотация

Текст статьи