БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 9, с. 1338–1344
УДК 577.174.5
Количественное аффинное взаимодействие убиквитинированных и неубиквитинированных белков с Rpn10-субъединицей протеасом
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Rpn10-субъединица протеасом, Rpn10-связывающие белки, оптический биосенсор, убиквитиновая сигнатура.
Аннотация
Протеомное профилирование препаратов мозга мышей с использованием в качестве аффинного лиганда рецептора убиквитина – Rpn10-субъединицы протеасом – выявило репрезентативную группу белков, связывающихся с этим сорбентом (Медведев А.Е. и др. (2017) Биохимия, 82, 470–480). В данной работе исследовали взаимодействие Rpn10-субъединицы протеасом с некоторыми из этих идентифицированных белков: глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой (ГАФД), пируваткиназой, гистонами H2A и Н2В. Проведенное исследование показало: 1) количественное взаимодействие субъединицы протеасом, иммобилизованной на кювете оптического биосенсора Biacore-3000, как c ГАФД (Кd = 2,4 × 10–6 M), так и с пируваткиназой (Кd = 2,8 × 10–5 M); 2) количественное высокоаффинное взаимодействие иммобилизованных гистонов H2A и Н2В с Rpn10-субъединицей (значения Кd = 6,5 × 10–8 и 3,2 × 10–9 M соответственно). Масс-спектрометрический анализ выявил присутствие убиквитиновой сигнатуры (GG) только в высокоочищенном препарате ГАФД. Предполагается, что связывание (особенное высокоаффинное) неубиквитинированных белков с Rpn10-субъединицей протеасом может как регулировать работу этого протеасомного рецептора убиквитина (конкурируя с убиквитинированными субстратами), так и способствовать активации других путей поступления в протеасому белков, подлежащих протеолитической деградации.