БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 7, с. 1107–1117
УДК 577.152.18
Экспрессия, очистка и определение активности ActhiS — фермента биосинтеза тиазола у Acremonium chrysogenum
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Acremonium chrysogenum, ActhiS, ADT, биосинтез тиазола.
Аннотация
Тиаминпирофосфат является незаменимым для всех живых организмов коферментом. Его биосинтез включает независимые стадии синтеза предшественников: пиримидина и тиазола, которые затем сшиваются. В нашей предыдущей работе нами было показано существование корреляции повышенной экспрессии ActhiS и блокирования синтеза ActhiS с внутриклеточным содержанием тиамина у Acremonium chrysogenum. Однако до сих пор отсутствуют точные данные о структуре и функциях ActhiS. В настоящей работе с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) и ЯМР-спектроскопии охарактеризована связанная форма, состоящая из производного ADP — 5-(2-гидроксиэтил)-4-метилтиазол-2-карбоновой кислоты (ADT — 5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazole-2-carboxylic acid). Свободная от метаболита форма ActhiS, экспрессированная в клетках, культивируемых на минимальной среде M9, катализировала превращение NAD+ и глицина в ADT в присутствии ионов железа. Кроме того, показано, что остаток цистеина C217 является донором атома серы для образования тиазола. Наши данные подтверждают, что ActhiS является ферментом биосинтеза тиазола и одновременно источником атома серы у A. chrysogenum.