БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 7, с. 1069–1074
УДК 577.152.2
Сигнальная пептидаза из Escherichia coli распознает и расщепляет сигнальную последовательность архей
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: α-aмилаза, Thermococcus kodakarensis, сигнальный пептид, очистка, масс-спектрометрия, секвенирование N-концевого участка.
Аннотация
Открытая рамка считывания гена Tk1884 из Thermococcus kodakarensis, кодирующая α-амилазу, была клонирована вместе с нативной сигнальной последовательностью и экспрессирована в клетках Escherichia coli. Гетерологичная экспрессия гена привела к секреции рекомбинантного белка в культуральную среду. Внеклеточная активность α-амилазы после индукции постепенно возрастала. Белок Tk1884 был выделен из культуральной среды. При определении его молекулярной массы с помощью метода масс-спектрометрии с ионизацией электронапылением было обнаружено отщепление нескольких аминокислотных остатков. В связи с этим была определена N-концевая последовательность очищенного белка Tk1884, которая показала, что сигнальный пептид подвергся расщеплению пептидной связи между остатками Ala26 и Ala27 сигнальной пептидазой E. coli. По нашим сведениям, это первая работа, в которой показано, что сигнальная пептидаза из E. coli распознает и расщепляет сигнальную последовательность архей.