БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 2, с. 301–308
УДК 577.112
Высокий уровень экспрессии и АТФазная активность рекомбинантного растворимого белка теплового шока GRP78 человека
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: белок GRP78, АТФаза, аутоиндукция, мономер, активный центр.
Аннотация
Обнаружено, что белок теплового шока GRP78 стимулирует рост опухолей, поэтому он может рассматриваться в качестве новой мишени для действия противораковых лекарств. Актуальным остается вопрос о получении больших количеств полноцепочечного рекомбинантного белка GRP78. В данной работе показано, что этот рекомбинантный белок GRP78 можно получать в значительных количествах в активном состоянии путем аутоиндукции клеток E. coli. Конечный выход белка составлял ~50 мг на 1 л культуры клеток, подвергшихся аутоиндукции. С помощью метода гель-фильтрации показано, что полученный шапероновый белок находится в мономерном состоянии. Очищенный белок GRP78 человека катализирует превращение АТФ в АДФ и не требует ионов металлов в качестве кофакторов. Три мутантные формы белка, содержащие единичные аминокислотные замены, а именно T38A, T229A и S300A, демонстрировали меньшую АТФазную активность по сравнению с белком дикого типа, что указывает на локализацию активного центра АТФазы в отрицательно заряженной полости белка. Замены аминокислотных остатков в отрицательно заряженной полости, приводящие к значительному снижению активности фермента, указывают на их важную роль в ферментативной активности.