БИОХИМИЯ, 2017, том 82, вып. 2, с. 280–289
УДК 577.353.2
Хроническая алкогольная интоксикация не сопровождается увеличением протеолитической активности кальпаинов в сердечной мышце крыс
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: мышца, μ-кальпаин, кальпастатин, тайтин/титин, хронически алкоголизированные крысы.
Аннотация
Проведены исследования ферментативной активности Са2+-активируемых протеаз кальпаинов, а также содержания и экспрессии генов μ-кальпаина (активируемого при микромолярных концентрациях ионов кальция), кальпастатина (ингибитора кальпаинов), тайтина/титина (субстрата кальпаинов) в сердечной мышце крыс, хронически алкоголизированных в течение 3-х и 6-ти мес. У алкоголизированных крыс не зарегистрировано увеличения параметра «масса сердца/масса тела», указывающего на развитие гипертрофии сердца, однако выявлена тенденция к снижению этого параметра у крыс после 6-месячного моделирования алкогольной кардиомиопатии, что указывает на развитие атрофических изменений в миокарде. Флуориметрические измерения, проведенные с использованием Calpain Activity Assay Kit, не выявили изменений общей активности кальпаинов в белковых экстрактах сердечной мышцы крыс, алкоголизированных в течение 3-х и 6-ти мес. Методом Вестерн-блот анализа не обнаружены достоверные изменения в содержании μ-кальпаина и кальпастатина, а также не выявлено методом ДСН-ПААГ-электрофореза снижения содержания тайтина в миокарде крыс после хронической алкогольной интоксикации. Не зарегистрирован аутолиз μ-кальпаина, что может указывать на отсутствие повышенной протеолитической активности этого фермента в миокарде хронически алкоголизированных крыс. С использованием флуоресцентного красителя фосфатных групп белков Pro-Q Diamond не обнаружено изменений в уровне фосфорилирования тайтина в сердечной мышце крыс, хронически алкоголизированных в течение 3-х и 6-ти мес. Методом ПЦР в режиме реального времени обнаружено снижение содержания мРНК μ-кальпаина (в ~1,3 раза, p =< 0,01) и кальпастатина (в ~1,9 раза, p =< 0,01) в миокарде крыс, алкоголизированных в течение 3-х мес., и снижение содержания мРНК кальпастатина (в ~1,4 раза, p =< 0,01) у животных, алкоголизированных в течение 6-ти мес. Полученные результаты свидетельствуют о негативном влиянии хронической алкогольной интоксикации на экспрессию генов вышеуказанных белков.