БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 12, с. 1819–1827
УДК 577.29
Нокдаун белков поддержания мини-хромосом ингибирует образование скоплений сенсорного медиатора повреждений ДНК 1 в ответ на повреждение ДНК в клетках ТЕ-1 сквамозно-клеточной карциномы пищевода у человека
1 Henan Province Hospital of TCM, Department of Gastroenterology, 450002 Zhengzhou, Henan, China
2 Henan University of Chinese Medicine, 450008 Zhengzhou, Henan, China; E-mail: wangruijie8954@126.com
3 Shenzhen Luohu People’s Hospital, Department of Gastroenterology, Shenzhen, 518001 Guangdong, China
Поступила в редакцию 11.05.2016
После доработки 01.07.2016
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сквамозно-клеточная карцинома; репарация повреждений ДНК; сенсорный медиатор повреждений ДНК 1; белок комплекса поддержания мини-хромосом.
Аннотация
Заболеваемость сквамозно-клеточной карциномой пищевода (ESCC) в Китае высока, и исход этого заболевания во многом зависит от успешного применения адъювантной химиотерапии. Однако репарация ДНК в опухолевых клетках оказывает существенное влияние на результат лечения. Проведено исследование механизма участия белка MDC1 и белков комплекса МСМ в ответ на повреждение ДНК в клетках ESCC. Сконструированы векторы рекомбинации для MDC1 и белков MCM с прикрепленными тэгами, эти векторы были трансфицированы в клетки линии ТЕ-1 ESCC человека. Для выявления белков MCM, взаимодействующих с MDC1, использовали методы иммунопреципитации и масс-спектрометрии. Прямое взаимодействие этих белков также подтверждено с помощью метода вытеснения (pull-down) глутатион S-трансферазы (GST) in vitro. Гены MCM2 и MCM6 были нокаутированы с помощью shРНК, после чего была изучена хроматин-содержащая фракция белка MDC1 и отмечено образование скоплений этого белка в результате повреждения ДНК блеомицином. Результаты показали, что белки MCM2, МСМ3, МСМ5 и МСМ6 осаждаются антителами против тэга, прикрепленного к белку MDC1, и тест вытеснения GST-тэга подтвердил прямое взаимодействие этих белков. Нокдаун MCM2 или MCM6 уменьшал хроматин-содержащую фракцию белка MDC1 и в значительной степени вызывал ингибирование образования скоплений белка MDC1 в ядрах клеток TE-1 в ответ на повреждение ДНК блеомицином (P < 0,001). Показано существование прямого взаимодействия между MDC1 и белками MCM в ядрах клеток TE-1. Снижение активности белков MCM вызывает ингибирование хроматин-содержащей фракции и образования скоплений белка MDC1 в клетках TE-1 в ответ на повреждения ДНК, что создает основу для использования белков MCM и MDC1 в качестве возможных мишеней для повышения эффективности химиотерапии при ESCC.