БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 10, с. 1451–1462
УДК 577. 151.4
Биохимические свойства и противоопухолевая активность новой рекомбинантной L-аспарагиназы из Synechococcus elongatus PCC6803
1 Zagazig University, Faculty of Science, Botany and Microbiology Department, El-Gamaa Street 1, 44519 Zagazig-Sharkia, Egypt; E-mail: rkebeish@gmail.com, rkebeish@taibahu.edu.sa
2 Taibah University, Faculty of Science Yanbu, Biology Department, King Khalid Rd., Al amoedi, 46423 Yanbu El-Bahr, Saudi Arabia
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цианобактерии, L-аспарагиназа, молекулярное клонирование, противоопухолевые свойства.
Аннотация
L-аспарагиназа (EC 3.5.1.1) катализирует реакцию деамидирования L-аспарагина с образованием L-аспарагиновой кислоты и аммиака, и широко используется в качестве одного из основных лекарств при лечении опухолевых заболеваний. Существующие в настоящее время препараты L-аспарагиназы бактериального происхождения могут проявлять токсичность и вызывать реакции гиперчувствительности при применении в лечебных целях. Целью настоящей работы был поиск новых L-аспарагиназ, обладающих уникальными биохимическими свойствами и менее выраженными побочными эффектами. Показано, что штамм цианобактерий Synechococcus elongatus PCC6803 может рассматриваться в качестве нового источника L-аспарагиназы. Последовательность гена L-аспарагиназы (gi:939195038) была клонирована и экспрессирована в клетках E. coli BL21 (DE3) с получением рекомбинантного белка Se.ASPII, который был очищен с помощью аффинной хроматографии. Полученный фермент обладал высоким сродством к L-аспарагину и низким сродством к L-глутамину. Исследованы ферментативные свойства рекомбинантного белка и измерены его кинетические параметры (Km, Vmax), а также проанализированы профили активности данного фермента в зависимости от значений pH и температуры. Кроме того, была проведена оценка противоопухолевых свойств нового фермента с использованием различных линий опухолевых клеток человека.