БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 9, с. 1269–1279
УДК 577.1
Идентификация белков, взаимодействие которых с Na+,K+-ATPазой активируется уабаином
1 Московский государственный университета им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, 119991 Москва, Россия; факс: +7(495)939-3955, электронная почта: od_lopina@mail.ru
2 Национальный исследовательский Томский государственный университет, 634050 Томск, Россия; факс: (3822)529-852, электронная почта: sergeiorlov@yandex.ru
3 Сибирский государственный медицинский университет, 634050 Томск, Россия; факс: (3822)420-954, электронная почта: sergeiorlov@yandex.ru
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Na+,K+-ATPаза, уабаин, иммунопреципитация, двумерный электрофорез, масс-спектрометрия, сигнальные белки.
Аннотация
Ранее было показано, что длительное выдерживание в присутствии уабаина и других кардиотонических стероидов приводит к смерти различных клеток эпителия – клеток эпителия почечных канальцев собаки (MDCK), эндотелия сосудов аорты свиньи (PAEC) и пупочной вены человека (HUVEC), цервикальной аденокарциномы (HeLa) и аденокарциномы толстого кишечника (Caco-2). Интермедиаты сигнального каскада, приводящие к смерти клеток, остаются неизвестными. В настоящем исследовании мы использовали методы протеомики для идентификации белков, взаимодействие которых с Na+,K+-ATPазой активируется уабаином. После выдерживания клеток Caco-2 в течение 3 ч в присутствии 3 мкM уабаина были получены лизаты клеток и проведена иммунопреципитация Na+,K+-АТРазы в комплексе со взаимодействующими белками с использованием антител против α1-субъединицы фермента. Белки иммунопреципитатов были разделены методом двумерного ПААГ-электрофореза, в результате чего выявлен ряд белков с молекулярными массами 71–74, 46, 40–43, 38 и 33–35 кДа, связывание которых с Na+,K+-АТРазой активируется уабаином. Анализ методом масс-спектрометрии позволил идентифицировать часть из них, включая семь сигнальных белков из суперсемейств глюкокортикоидных рецепторов, серин/треониновых протеинкиназ и фосфатаз 2C, Src- и Rho-GTPаз. Обсуждается возможная роль этих белков в активации сигнального каскада, приводящего к смерти клеток.