БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 6, с. 830–834
УДК 577.213.3
Использование нового сайта рестрикции при проведении PCR-RFLP для идентификации полиморфизма гена POT1
1 Университет Чженьчжоу, медицинский колледж, кафедра профессионального здоровья и профессиональных заболеваний, Чженьчжоу 450001, Китай; факс: +86-371-6778-1466, электронная почта: ww375@126.com
2 Хеньаньский Институт профессиональных заболеваний, кафедра профессионального здоровья, Чженьчжоу 450052, Китай; электронная почта: 13526723488@163.com
3 Университет Чженьчжоу, медицинский колледж, кафедра гигиены и токсикологии, Чженьчжоу 450001, Китай; электронная почта: wuyongjun@zzu.edu.cn
4 Университет Чженьчжоу, медицинский колледж, кафедра санитарной химии, Чженьчжоу 450001, Китай; электронная почта: 360061525@qq.com
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: созданный сайт рестрикции, одиночный нуклеотидный полиморфизм, белок защиты теломер 1.
Аннотация
Белок POT1 (protection of telomeres protein 1, белок защиты теломер 1) вместе с другими белками, которые связываются с теломерами, играет ключевую роль в процессе защиты концов хромосом и регуляции длины теломер. Установлена связь между генетическими полиморфизмами гена, кодирующего этот белок, и многими заболеваниями. В представленной работе был использован новый метод PCR-RFLP (ПЦР – полиморфизм длин фрагментов рестрикции) для типирования однонуклеотидного полиморфизма (SNP – single nucleotide polymorphism) rs1034794 в гене POT1 человека. Новый сайт для фермента рестрикции был введен в продукт амплификации гена POT1 с помощью полимеразной цепной реакции (метод CRS-PCR). Один праймер был создан на основе измененной последовательности. После ПЦР-опосредованной амплификации новый сайт для рестриктазы AluI был введен в продукты ПЦР. Для проведения оценки этого метода были протестированы 178 образцов от представителей китайской популяции Хань. 3′-конец прямого праймера располагался сразу за полиморфным сайтом, третье основание от 3′-конца было несовпадающее основание T. При амплификации аллелей предкового гена POT1, конечный продукт ПЦР содержал последовательность AGCT (сайт распознавания рестриктазой AluI). Полученные с помощью нового метода данные точно воспроизводили результаты, полученные при секвенировании. Таким образом, метод CRS-PCR является новым экономичным и высокоэффективным альтернативным методом для типирования однонуклеотидного полиморфизма rs1034794 в гене POT1.