БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 6, с. 754–763
УДК 577.151.4
Повышение активности p72 вызывает усиление миграции и инвазии клеток глиомы в результате подавления экспрессии гена Beclin1
1 Первая больница при медицинском университете провинции Ляонин, отделение нейрохирургии, Китай, 121001 Цзиньчжоу
2 Медицинский университет провинции Ляонин, кафедра гистологии и эмбриологии, Китай, 121001 Цзиньчжоу; электронная почта: Songzhenxing151121@163.com
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: глиома, p72, miR-34-5p, miR-5195-3p, Beclin 1.
Аннотация
Белок p72 относится к РНК-хеликазам, которые содержат аминокислотную последовательность, называемую DEAD-бокс. Ферменты этого семейства способны раскручивать двойную цепь РНК и эффективны в процессинге микроРНК (miRNA, miR). Однако их роль в развитии глиомы до сих пор остается неизвестной. В настоящей работе с помощью Вестерн-блоттинга было исследовано влияние экспрессии p72 в прогрессировании глиомы. С этой целью в клетки A172 и T98G был введен аденовирус, ингибирующий ген, кодирующий p72. Аутофагию клеток оценивали путем подсчета пятен GFP-LC3, а апоптоз клеток определяли методом проточной цитофлуориметрии. Влияние гена Вeclin1 изучали с помощью подсчета пятен GFP-LC3, проточной цитофлуориметрии и колонеобразования. МикроРНК, нацеленные на 3′-нетранслируемый участок (3′-UTR – 3′-untranslated region) гена Вeclin1, были предсказаны с помощью программы TargetScan. Двойной тест репортерного гена люциферазы был использован для определения связывания этих микроРНК с 3’UTR гена Вeclin1. Экспрессия p72 была значительно повышена в линиях клеток и тканях глиомы. Обнаружено, что при ингибировании р72 происходит значительное усиление экспрессии ассоциированного с аутофагией белка беклин1. Накопление пятен GFP-LC3 было значительным в клетках, подвергнутых трансфекции ad-sh-p72, в сравнении клетками, трансфицированными ad-con. Показано, что способность образовывать колонии и интенсивность апоптоза клеток снижаются при ингибировании гена p72. Более того, повышение экспрессии гена Вeclin1 вносит вклад в процесс аутофагии клеток A172, их инвазию и апоптоз. Повышенная экспрессия гена p72 индуцирует экспрессию miR-34-5p и miR-5195-3p в клетках A172 и T98G. Показано, что ген Вeclin1 является геном-мишенью для действия miR-34-5p и miR-5195-3p. Таким образом, впервые показано, что гиперэкспрессия p72 снижает экспрессию гена Вeclin1, частично, за счет экспрессии miR-34-5p и miR-5195-3p в клетках A172 и T98G.