БИОХИМИЯ, 2016, том 81, вып. 5, с. 668–677
УДК 577.112
Рекомбинантный лизостафин Staphylococcus simulans: получение, очистка и определение противостафилококковой активности
Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава РФ, 123098 Москва; электронная почта: boksha_irina@mail.ru
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Staphylococcus simulans, Escherichia coli, рекомбинантный лизостафин, гетерологичная экспрессия, жидкостная хроматография, литическая активность, клинические изоляты Staphylococcus sp.
Аннотация
Лизостафин Staphylococcus simulans – эндопептидаза, лизирующая клеточные стенки стафилококков посредством расщепления пентаглициновых поперечных сшивок пептидогликана. Синтетический ген лизостафина S. simulans клонирован в клетках Escherichia coli, получены штаммы-продуценты рекомбинантного лизостафина. Уровень продукции биологически активного лизостафина в штаммах-продуцентах E. coli M15 или BL21 при периодическом культивировании составил 6–30% общего клеточного белка. Разработаны новые методы очистки лизостафина, не содержащего аффинных доменов, и определения его активности. На основании данных ПААГ-электрофореза чистота очищенного рекомбинантного лизостафина составляет >97%. Полученный препарат лизировал клинические изоляты Staphylococcus aureus и Staphylococcus haemolyticus. Активность in vitro и общие биохимические свойства очищенного рекомбинантного лизостафина, продуцируемого обоими штаммами E. coli, идентичны таковым рекомбинантного коммерчески доступного лизостафина. Благодаря простоте очистки, высокой чистоте и противостафилококковой активности, полученный рекомбинантный лизостафин представляет собой перспективный продукт для применения в медицине и ветеринарии.