БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 11, с. 1741–1755
УДК 577.152.3
Укороченные варианты олигопептидазы В из Serratia proteamaculans с измененной активностью
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: олигопептидаза В, Serratia proteamaculans, ограниченный протеолиз, азоказеин, масс-спектрометрия MALDI-TOF, анализ информационной структуры аминокислотной последовательности белка.
Аннотация
Было установлено, что в присутствии 50%-ного глицерина обработка нативной психрофильной олигопептидазы В из Serratia proteamaculans (PSP, 78 кДа) растворимым или иммобилизованным на модифицированном кремнеземе МPG-PА химотрипсином приводит к образованию укороченной формы фермента (PSP-Сhtr, ~66 кДа), которая сохраняет активность в отношении низкомолекулярного субстрата PSP – BAPNA и, в отличие от PSP, активна в отношении белкового субстрата – азоказеина. С помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF было установлено, что в PSP-Сhtr отсутствует N-концевая область молекулы, которая, предположительно, препятствует гидролизу высокомолекулярных субстратов. Кроме того, было установлено, что отсутствующий в PSP-Сhtr фрагмент соответствует N-концевому элементу информационной структуры высшего ранга PSP, что подтверждает применимость метода анализа информационной структуры для белковой инженерии ферментов. Аналогичная обработка PSP иммобилизованным трипсином также приводила к образованию стабильной укороченной формы фермента (PSP-Тr, ~75 кДа), в которой отсутствовали 22 С-концевых аминокислотных остатка и которая полностью утрачивала ферментативную активность, предположительно, по причине изменения окружения His652 каталитической триады.