БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 10, с. 1578–1587
УДК 577.152.27
Выделение и очистка рекомбинантных белков серин-треониновых протеинкиназ штамма Bifidobacterium longum B379M и изучение их активности
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: серин-треониновые протеинкиназы, выделение и очистка белков, автофосфорилирование.
Аннотация
Ранее авторами у различных видов Bifidobacterium были идентифицированы шесть серин-треониновых протеинкиназ (СТПК), обозначенных Pkb1–Pkb6. В данной работе оптимизированы методы выделения их каталитических доменов из штамма B. longum B379M: разработаны методы выделения нативных белков Pkb3 и Pkb4, денатурированного белка Pkb5 и белков Pkb1, Pkb2, Pkb6 из телец включения, оптимизированы условия проведения диализа для ренатурации белков. Все ферменты выделены в количествах, достаточных для измерения активности, их гомогенность подтверждена данными Ds-Na-ПААГ-электрофореза. Впервые исследована способность к автофосфорилированию каталитических доменов протеинкиназ Pkb3 и Pkb4, выделенных в нативном виде, и протеинкиназ Pkb1 и Pkb6, выделенных из телец включения. Явление автофосфорилирования было обнаружено только у каталитического домена протеинкиназы Pkb3.