БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 10, с. 1561–1571
УДК 577.29
Фосфорилирование регулирует взаимодействие N-концевого домена высокомолекулярной киназы легких цепей миозина с актиновым цитоскелетом
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: высокомолекулярная киназа легких цепей миозина, связывание с актином, фосфорилирование, белок-белковые взаимодействия, цАМФ-зависимая протеинкиназа, протеинкиназа Aurora B.
Аннотация
Высокомолекулярная киназа легких цепей миозина (КЛЦМ210) представляет собой многофункциональный белок, участвующий в активации миозина II типа и интеграции компонентов клеточного цитоскелета. В центральной части молекулы и в составе N-концевого домена КЛЦМ210 располагаются участки взаимодействия с актином. В клетках HeLa показано фосфорилирование N-концевого домена КЛЦМ210 по остаткам серина, предположительно под действием активной в митозе протеинкиназы Aurora B (Дульянинова и Брезник, Exp. Cell Res., 2004), однако функциональная значимость данного фосфорилирования осталась неустановленной. Результаты настоящей работы указывают, что N-концевой актинсвязывающий участок КЛЦМ210 располагается в пределах 27–157 а.о. (N27-157, нумерация остатков приведена для КЛЦМ210 курицы). В условиях in vitro цАМФ-зависимая протеинкиназа (ПКА) и протеинкиназа Aurora B фосфорилируют N27-157 по остаткам S140 и S149, ослабляя его взаимодействие с актином. Эти же остатки фосфорилируются ПКА-зависимым образом в трансфицированных клетках HeLa. Более того, фосфоимитирующие мутанты N27-157 менее прочно связываются с детергент-нерастворимой цитоскелетной фракцией клеток, в то время как in vitro замена S149D ослабляет связывание N27-157 с F-актином в той же степени, как и фосфорилирование N27-157 под действием ПКА. Таким образом, фосфорилирование КЛЦМ210 по остаткам серина, в основном по S149, ослабляет взаимодействие N-концевого домена КЛЦМ210 с актиновым цитоскелетом и может регулировать способность КЛЦМ210 перешивать микрофиламенты в клетке.