БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 8, с. 1289–1297
УДК 577.152.3
Asp141 и цепочка водородных связей Asp141–Asn109–Asp33 обеспечивают активность и структурную стабильность сиалилтрансфераз класса GT80
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сиалилтрансфераза, цепочка водородных связей, главный функциональный остаток, стабильность, активность.
Аннотация
Сиалилтрансферазы – это главные ферменты, принимающие участие в биосинтезе физиологически и патологически значимых природных молекул, содержащих в своем составе сиаловые кислоты. В данной работе изучен не обладающий сиалилтрансферазной активностью рекомбинантный белок Pm0160, несущий естественную мутацию D141→Y в мотиве DDG, идентифицированном в сиалилтрансферазах семейств GT52 и GT80. Исследование различных мутантных форм этого белка показало, что единственная аминокислотная замена (Y141→D) приводила к восстановлению его способности к переносу сиаловых кислот. На основании анализа известной структуры кристаллов сиалилтрансфераз класса GT80 установлено, что между тремя консервативными аминокислотными остатками (Asp141, Asn109 и Asp33) внутри молекул этих ферментов возникает цепочка следующих друг за другом водородных связей. Проведенные эксперименты по мутагенезу показали, что цепочка последовательных внутримолекулярных связей между главным функциональным остатком (Asp141) и соответствующими аминокислотами в структурных доменах Nβ4, Nβ1 и Nα1, в большей степени важна для поддержания стабильности белка, чем для ориентации Asp141 в необходимой для катализа конформации.