БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 4, с. 544–555
УДК 577.4
Переходные состояния леггемоглобина и других гемопротеинов при их денатурации
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: денатурация, гемопротеин, свободная энергия Гиббса, переходные состояния, хаотропный агент.
Аннотация
Проведено исследование переходных состояний при развертывании мономерных белков леггемоглобина, миоглобина и цитохрома c с помощью спектрофотометрии в УФ-видимой области спектра, измерения стационарной флуоресценции и флуоресценции с разрешенным временем. Конформационная стабильность нативного «свернутого» состояния белков и их «развернутых» состояний были исследованы с точки зрения модели двух переходных состояний. Значения ΔGD (298° K) при двух переходных состояниях получены при денатурации хаотропными агентами (мочевиной и гуанидин-гидрохлоридом, Gdn-HСl). Значения свободной энергии леггемоглобина во время денатурации было ниже в сравнении с цитохромом c и миоглобином. Значение m было наименьшим для леггемоглобина, в сравнении с цитохромом c и миоглобином. Значение m (мера зависимости ΔGD от концентрации денатурирующего агента) для цитохрома c и миоглобина ниже, чем в случае денатурации мочевиной по сравнению с гуанидин-гидрохлоридом. Максимум поглощения в УФ-видимой области спектра и максимумы эмиссии флуоресценции в стационарном состоянии резко сдвигались в красную область в присутствии определенных концентраций, как в случае миоглобина, так и леггемоглобина, однако в случае цитохрома c картина была иной. Полученные данные были проанализированы с использованием модели двух переходных состояний. Данные по продолжительности жизни указывают на наличие промежуточного состояния во время денатурации. Развертывание белков может модулировать конформацию, стабильность и расположение на поверхности этих биологически активных белков.