БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 3, с. 399–411
УДК 577.112.083
Выделение, очистка и характеристика стабильного дефенсин-подобного противогрибкового пептида из семян Trigonella foenum-graecum (пажитника)
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: хроматографический метод, дефенсин-подобный противогрибковый пептид, MALDI-TOF-MS, биохимические и биофизические исследования, Trigonella foenum-graecum.
Аннотация
Новый дефенсин-подобный противогрибковый пептид (Tf-AFP) с молекулярным весом 10,3 кДа был выделен из семян Trigonella foenum-graecum (пажитник) с использованием методов осаждения сульфатом аммония, ионообменной хроматографии, гель-фильтрации, гидрофобной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии с обратной фазой (RP-HPLC). Молекулярный вес очищенного пептида, определенный методом масс-спектрометрического анализа, оказался равным 10321,5 Да. Данный пептид проявлял высокое структурное сходство с растительными белками дефенсинами и другими противогрибковыми белками, обнаруженными при проведении поиска в базах данных. Двумерный электрофорез в ПААГ выявил pI = 8,8 и отсутствие изоформ. Полученный пептид Tf-AFP ингибировал рост различных видов грибов, таких как Fusarium oxysporum, Fusarium solani и Rhizoctonia solani. Противогрибковая активность подавлялась в присутствии 50 мМ NaCl. Методом кругового дихроизма было показано, что белок богат элементами β-складчатой структуры и отличается высокой стабильностью в широком диапазоне температур. Интересно, что восстановление дисульфидных связей и денатурация химическими агентами не приводила к значительным изменениям вторичной структуры белка, что было подтверждено методами кругового дихроизма и флуоресцентной спектроскопии.