БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 2, с. 296–304
УДК 577.152.3
Клонирование и функциональная экспрессия кДНК хитиназы из моли – минера листьев яблочного дерева (Lithocolletis ringoniella)
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Lithocolletis ringoniella, хитиназа, RACE-ПЦР, ферментативная активность.
Аннотация
Хитиназа насекомых играет важную роль в катаболизме хитина, связанном с перевариванием и линькой насекомого в период его развития. В настоящей работе проведено клонирование кДНК хитиназы (LrCht5) из минера яблочного листа (Lithocolletis ringoniella) и определены аминокислотная последовательность и свойства белка. Длина кДНК хитиназы L. ringoniella насчитывала 2136 п.о. при открытой рамке считывания, равной 1737 п.о., и кодировала белок, состоящий из 579 а.о. с расчетной мол. массой 64,4 кДа и pI 5,49. В каталитическом домене находится несколько сайтов фосфорилирования и гликозилирования. Рекомбинантный LrCht5 экспрессировали в линиях клеток. Sf9 и LrCht5, экспрессированные в клетках насекомых, обладали хитинолитической активностью. LrCht5 был наиболее стабилен при pH 6 и 45°. Результаты настоящей работы могут быть использованы для разработки новых, более эффективных, синтетических ингибиторов хитиназы с перспективой их применения в качестве биоинсектицидов.