БИОХИМИЯ, 2015, том 80, вып. 2, с. 280–284
УДК 578.245
Получение рекомбинантного интерферона-λ3 мыши: экспрессия в клетках Escherichia coli в растворимой форме и очистка в одну стадию
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: интерферон-λ3, Escherichia coli, вектор экспрессии pET-44, рекомбинантный белок.
Аннотация
Интерферон (IFN)-λ3 – член семейства IFN типа III, является цитокином множественного действия и оказывает антипролиферативное, антивирусное и иммудомодулирующее действие. Для проведения функциональных исследований был разработан эффективный метод получения мышиного IFN-λ3 в больших количествах, включающий клонирование и экспрессию гибридного гена интерферона IFN-λ3, а также очистку рекомбинантного белка. С этой целью район кДНК, кодирующий зрелый белок IFN-λ3, был клонирован в прокариотический вектор экспрессии pET-44 и впоследствии экспрессирован в клетках Escherichia coli. Продуцирующийся в растворимой форме гибридный рекомбинантный белок содержал на С-конце гистидиновый гексапептид (His)6 и был очищен до гомогенного состояния методом металлаффинной хроматографии с использованием Ni2+-НТА (нитрилотриацетат)-агарозы. Установлено, что очищенный рекомбинантный IFN-λ3 существенно подавляет продукцию интерлейкина IL-13 макрофагами RAW264.7, стимулированными липополисахаридом. Показано, что продукция большого количества растворимого белка IFN-λ3 путем его экспрессии в клетках Escherichia coli с использованием вектора pET-44 является удачным способом получения нативного интерферона IFN-λ3. Разработанный метод может быть использован для получения интерферонов других типов.