БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 12, с. 1698–1704
УДК 571.27,577.29
Высокоспецифичный гибридный белок DARPin-mCherry для флуоресцентной визуализации клеток, гиперэкспрессирующих онкомаркер HER2/neu
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: DARPin, mCherry, онкомаркер HER2/neu.
Аннотация
Предложен простой и надежный способ детекции онкомаркера HER2/neu на поверхности опухолевых клеток с использованием адресного флуоресцентного гибридного белка DARPin-mCherry. В качестве адресного модуля, способного с высокой селективностью узнавать внеклеточный домен эпидермального фактора роста HER2/neu, использован белок DARPin9-29, принадлежащий к новому классу нацеливающих молекул неиммуноглобулиновой природы; в качестве детектирующего модуля применен красный флуоресцентный белок mCherry. Гибридный белок DARPin-mCherry получен с высоким выходом в бактериальной системе экспрессии, очищен из растворимой фракции в одну стадию с помощью аффинной хроматографии; полученный белок не склонен к агрегации. С помощью методов конфокальной микроскопии, проточной цитофлуориметрии и поверхностного плазмонного резонанса доказана специфичность связывания белка DARPin-mCherry с онкомаркером HER2/neu. Константа диссоциации комплекса белка DARPin-mCherry с рецептором HER2/neu, определенная методом поверхностного плазмонного резонанса, составила 4,5 нM. Вышеперечисленные характеристики гибридного белка DARPin-mCherry позволяют рассматривать его в качестве перспективного агента для иммунофлуоресцентного анализа и альтернативы используемым для этой цели антителам и их фрагментам, меченным флуоресцентными красителями.