БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 11, с. 1548–1553
УДК 577.152.2
Увеличение специфичности EcoDam ДНК-(аденин N6)-метилтрансферазы к ДНК-субстрату путем сайтспецифического мутагенеза
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: EcoDam, белковая инженерия, гемиметилированная ДНК, сайтспецифический мутагенез.
Аннотация
Ферменты ДНК-метилтрансферазы (МТазы), осуществляющие метилирование ДНК, широко распространены в клетках прокариот. С целью поиска форм фермента EcoDam с высокой специфичностью к гемиметилированной ДНК мы заменили остатки L122, P134 и V133 в молекуле белка на другие аминокислоты путем сайтспецифического мутагенеза и изучили каталитическую активность всех полученных мутантных форм фермента с использованием в качестве субстратов неметилированного и гемиметилированного олигонуклеотидного ДНК-субстрата. Мы установили, что замены L122→A, L122→S и L122→A/V133→L приводят к появлению мутантных форм EcoDam, способных распознавать присутствие CH3-группы в положении N6 аденинового основания в области двухспирального участка узнавания (5′-GATC-3’/3′-CTAG-5′) и метилировать только гемиметилированный ДНК-субстрат.