Анализ активности и регуляции удлиненного «–10» rpsB-промотора Escherichia coli in vivo

Аннотация

Как мы показали ранее, транскрипция оперона rpsB-tsf, кодирующего жизненно важные компоненты трансляционного аппарата – рибосомный белок S2 и фактор элонгации Ts, направляется единственным промотором P_rpsB, который высоко консервативен у гамма-протеобактерий. P_rpsB относится к классу удлиненных «–10»-промоторов и включает TGTG-удлинение перед «–10»-гексамером ТАТААА, субоптимальную область «–35» (TTGGTG) и GC-богатый дискриминатор (GCGCGC), отделяющий «–10»-элемент от транскрипционного старта. В данной работе мы исследовали влияние направленных мутаций в rpsB-промоторной области на экспрессию репортерного гена P_rpsB–lacZ в составе хромосомы E. coli, а также регуляцию промотора транскрипционными факторами ppGpp и DksA при аминокислотном голодании. Показано, что уровень транскрипции зависит как от TGTG-удлинения, так и от TTG-элемента в области «–35», и мутации в этих природных последовательностях приводят к очень сильному снижению промоторной активности. При индукции аминокислотного голодания rpsB-промотор негативно регулируется ppGpp благодаря присутствию GC-богатого дискриминатора, замена которого на АТ-богатый элемент упраздняет строгий контроль. Эти и другие полученные данные показывают необходимость сочетания всех консервативных элементов rpsB-промотора для эффективной и регулируемой транскрипции жизненно важного оперона rpsB-tsf.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: