БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 7, с. 873–887
УДК 577.218
Исследование влияния замены предпоследнего остатка в OmpY порине Yersinia pseudotuberculosis на его экспрессию, структуру и функциональные свойства
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Yersinia pseudotuberculosis, порообразующие белки наружной мембраны, сайт-направленный мутагенез, биогенез поринов, пространственная структура и моделирование.
Аннотация
Задача данного исследования состояла в сравнении гетерологичной экспрессии двух белков Yersinia pseudotuberculosis: порина OmpY дикого типа и мутантного порина OmpY, названного OmpY-Q, с нейтральным аминокислотным остатком Gln вместо положительно заряженного Arg в предпоследнем положении. Согласно литературным данным, подобная замена (Lys на Gln) предпоследнего остатка в порине PorA Neisseria meningitides приводит к значительному повышению эффективности сборки белка в наружной мембране (НМ) E. coli in vivo. Был проведен сайт-направленный мутагенез для замещения в OmpY Arg на Gln (R338Q), а также подобраны условия для экспрессии и созревания OmpY-Q. Установлено, что скорости роста штаммов E. coli, продуцирующих OmpY и OmpY-Q, и уровень экспрессии поринов были примерно одинаковыми. Сравнительный анализ рекомбинантных OmpY и OmpY-Q не обнаружил существенных различий в структуре и функциональных свойствах этих поринов и не выявил заметного влияния замены R338Q в OmpY на его сборку в НМ E. coli in vivo. Возможные причины несовпадения наших результатов с данными, полученными ранее для порина PorA, обсуждаются с использованием известных механизмов биогенеза поринов на периплазматической стадии.