БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 7, с. 821–833
УДК 577.152.3
Ортолог фактора отсутствия глаз Caenorhabditis elegans EYA-1 необходим для обеспечения устойчивости к стрессам
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: EYA-1, Caenorhabditis elegans, РНК-интерференция, устойчивость к стрессу.
Аннотация
Фактор отсутствия глаз (eya) является высококонсервативным транскрипционным кофактором и одновременно фосфатазой белков и регулирует множество процессов, происходящих в ходе развития многоклеточных животных. Данный белок обладает двойной функцией, работая в ядре в качестве транскрипционного фактора и функционируя в качестве тирозиновой киназы в цитоплазме. В данной работе мы выделили единственный гомолог фактора отсутствия глаз у Caenorhabditis elegans – EYA-1 и разработали эффективную систему подавления экспрессии соответствующего гена с помощью РНК-интерференции, основанную на питании животного. Нам удалось установить, что нокдаун EYA-1 снижает устойчивость к тепловому и окислительному стрессам, ускоряя развитие паралича, вызываемого протеотоксичностью Aβ1–42 и поли-Q. При тепловом стрессе (35°) нокдаун EYA-1 снижает среднюю продолжительность жизни на 16,8%, что может быть связано со снижением экспрессии гена белка теплового шока 16,2 (hsp-16.2). В условиях окислительного стресса нокдаун укорачивает среднюю продолжительность жизни на 18,7%, что, видимо, опосредовано накоплением внутриклеточных АФК и снижением экспрессии гена супероксиддисмутазы-3 (sod-3). Помимо этого, у животных с нокдауном EYA-1 при окислительном стрессе наблюдалось повышенное накопление липофусцина. Дальнейшие исследования показали, что нокдаун EYA-1 не ингибировал накопление в ядре daf-16 в ответ на стресс у червей дикого типа. С другой стороны, недостаток EYA-1 не приводил к дальнейшему снижению стрессоустойчивости у мутантных по гену daf-16 животных, чувствительных к стрессам. С помощью количественной ПЦР в реальном времени показано, что экспрессия двух генов-мишеней daf-16 – hsp-12.3 и sod-3 снижалась в стрессовых условиях при РНКи-опосредованном подавлении EYA-1. Все установленные факты указывают на то, что EYA-1 необходим для устойчивости червей к стрессовым условиям и, по всей видимости, действует как регулятор экспрессии ассоциированных со стрессоустойчивостью генов уровнем ниже, чем daf-16.