БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 6, с. 693–704
УДК 577.24
Влияние тoчечных замен в минимальном ДНК-связывающем домене фактора пигментной ксеродермы А на взаимодействие с ДНК-интермедиатами эксцизионной репарации нуклеотидов
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: эксцизионная репарация нуклеотидов, мутантные формы XPA, комплексообразование.
Аннотация
Фактор пигментной ксеродермы А (ХРА) – один из ключевых белков процесса эксцизионной репарации нуклеотидов (NER). Проведен анализ влияния точечных замен в ДНК-связывающем домене ХРА – положительно заряженные остатки лизина заменены отрицательно заряженными остатками глутамата: XPA K204E, K179E, K141E и K141/179E (двойной мутант) – на взаимодействие белка с ДНК-структурами, моделирующими интермедиаты процесса NER на стадии узнавания повреждения и формирования предрасщепляющего комплекса. Введение аминокислотных замен, в целом, снизило сродство мутантных белков к исследованным ДНК, величина эффекта зависела от произведенной замены и структуры ДНК. Все мутанты, как и белок дикого типа, с наибольшей эффективностью связывали частично открытый поврежденный ДНК-дуплекс, сродство к которому снижалось в ряду: K204E > K179E >> K141E = K141/179E. Снижение уровня связывания мутантных белков с полным ДНК-дуплексом и одноцепочечной ДНК было более существенным, чем с ДНК, содержащей «пузырь», причем разница в сродстве возрастала по мере общего снижения ДНК-связывающей активности мутанта. Методом фотоиндуцированных пришивок к остатку 5-йодоdUMP в различных положениях поврежденной цепи частично открытого ДНК-дуплекса показано, что ни одна из исследованных замен в ХРА не влияет на расположение белка на ДНК. Полученные результаты вместе с данными литературы позволяют предположить отсутствие прямой корреляции между сродством ХРА к ДНК и влияния фактора на процесс репарации.