БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 2, с. 178–186
УДК 577.27
Поиск лиганда ГМДП с использованием его пептидного миметика
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: пептид-миметик, ГМДП, YB-1.
Аннотация
Описан метод поиска лигандов соединений, обладающих адъювантным эффектом. Данный метод включает в себя выделение полисом с использованием иммобилизованного пептида-миметика N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглютамина (ГМДП) – RN-пептида. После проведения аффинной хроматографии и отмывки комплексы RN-пептида с целевыми последовательностями разрушались гуанидингидрохлоридом. Полученную мРНК использовали для синтеза кДНК и последующего клонирования в экспрессирующий вектор. Эффективность метода была доказана в ходе последующих исследований. С использованием биотинилированного RN-пептида были отобраны клоны, взаимодействующие с пептидом. Выяснилось, что все клоны кодируют последовательность, идентичную белку YB-1. Были получены рекомбинантные антитела к белку YB-1, отобранные из библиотеки scFv человека в формате фагового дисплея. С помощью данных антител была определена константа связывания RN-пептида с белком YB-1. Был проведен конкурентный анализ, который показал, что RN-пептид и ГМДП конкурируют за один и тот же участок белка YB-1.