БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 1, с. 33–40
УДК 577.114.4
Новый способ обнаружения глицерретовой кислоты на поверхности клеток флуоресцентным методом c использованием полупроводниковых наночастиц квантум дот
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: флуоресцентное обнаружение, глицерретовая кислота, квантум дот, «клик-реакция».
Аннотация
Глицерретовая кислота (GA) – производное пентациклического тритерпеноида, образующееся при гидролизе глицерризовой кислоты, была обнаружена в связи с ее антиастматическим действием синергично с агонистами β2-адренергических рецепторов (β2-АR) в опосредуемом этими рецепторами регуляторном пути. Наше исследование ставило своей целью выявить места локализации GA в экспрессирующих β2-АR клетках человека с использованием биохимических и физико-химических подходов. Нами были синтезированы полупроводниковые нанокристаллы CdTe/ZnS квантум дот (QD), модифицированные алкиновыми группировками (QD-AL), а также было получено производное глицерретовой кислоты, несущее концевую азидную группу N3 (ATGA). Средний размер полученных наночастиц QD-AL составил ~10 нм, длина волны эмиссии их флуоресценции равнялась 620 нм. Эти наночастицы были использованы для флуоресцентного обнаружения глицерретовой кислоты и изучения ее распределения на клетках почек эмбрионов человека, экспрессирующих β2-АR (линия EK293-β2AR). Способность QD-AL специфически взаимодействовать с ATGA на клеточной мембране была изучена также методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии и путем анализа конкурентного ингибирования связывания ATGA с клетками в присутствии GA. Полученные нами данные свидетельствовали о том, что частицы QD-AL могли узнавать ATGA и взаимодействовать с ней на клеточной поверхности в результате «клик-реакции», что явилось новым подходом к изучению локализации GA. Предложенный нами флуоресцентный метод может быть применен для изучения механизма антиастматического синергического действия GA и β2-AR агонистов в регуляторном пути, опосредуемом β2-адренергическими рецепторами.