БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 1, с. 13–21
УДК 577.218
Экспрессия белка GRP94 на базолатеральных мембранах париетальных клеток слизистой оболочки желудка
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: париетальные (пристеночные) клетки слизистой оболочки желудка, шапероны, рецептор аденозина.
Аннотация
Белок GRP94 является членом семейства протеинов теплового шока (Hsp) и обычно располагается в эндоплазматическом ретикулуме (ЭР). Иногда он может экскретироваться, минуя KDEL-зависимый механизм удерживания белков в ЭР. Избыточная экспрессия GRP94 происходит в клетках карцином желудка или желудочно-кишечного тракта. Однако мало что известно о физиологической роли этого белка в клетках слизистой оболочки желудка. Мы определяли содержание GRP94 в мембранах пристеночных клеток слизистой оболочки желудка кролика, секретирующих соляную кислоту, используя различные способы фракционирования субклеточных компонентов и селективной солюбилизации клеточных мембранных белков, метод вестерн-блоттинга, а также изучали связывание радиоактивного лиганда с мембранами париетальных клеток. Было установлено, что функционально активный белок GRP94 экспрессирован на поверхности пристеночных клеток слизистой оболочки желудка и располагается на мембранах их базолатеральных доменов. Мы показали, что GRP94 не является интегральным мембранным белком, поскольку частично экстрагируется 50 мМ Na2CO3. Однако даже 100 мМ Na2CO3 экстрагировал не весь белок GRP94, что свидетельствовало о прочности его связывания с плазматическими мембранами. Присутствие GRP94 в изолированных плазматических мембранах было продемонстрировано методом вестерн-блоттинга, а его функционирование – в экспериментах по связыванию меченного радиоактивного лиганда N-этилкарбоксамидо[3H]аденозина ([3H]NECA). Рассчитанные двумя способами значения равновесной константы диссоциации (KD) для этого лиганда при 4° находились в диапазоне нмолей, а ингибирование связывания лиганда под действием специфичного к GRP94 конкурентного ингибитора радицикола свидетельствовало о том, что акцепторный участок белка был экспонирован на поверхность мембраны. Анализ мембранных субфракций методом вестерн-блоттинга показал, что GRP94 экспрессируется на базолатеральной мембране пристеночных клеток слизистой оболочки желудка, в то время как его содержание в мембране апикальной части клеток незначительно. Таким образом, можно предположить, что GRP94 участвует в функционировании базолатеральных мембран.