БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 12, с. 1730–1737
УДК 577.153.3
Идентификация нового гена ClFATB1, кодирующего ацил-АСР тиоэстеразу из Cinnamomum longepaniculatum
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: АСР, ацил-АСР тиоэстераза, Cinnamomum longepaniculatum, жирная кислота, трансгенная линия табака.
Аннотация
Полноразмерная последовательность, названная ClFATB1 и предположительно кодирующая тиоэстеразу, расщепляющую тиоэфирную связь между ацилом и ацилпереносящим белком (ацил-↓-АСР), была получена из библиотеки кДНК семян Cinnamomum longepaniculatum методом SMART-RACE. Новый ген кодировал белок размером 382 аминокислотных остатка, гомологичный тиоэстеразам жирных кислот типа В (FATB) из различных растений и содержащий два важных для каталитической эстеразной активности остатка (His285 и Cys320). Транскрипция этого гена происходила во всех органах C. longepaniculatum, но преимущественно наблюдалась в семенах. Рекомбинантный белок CLFATB1, экспрессированный в клетках Escherichia coli, гидролизовал тиоэфирные связи между насыщенными С16:0 и С18:0 жирными кислотами и ACP с большей активностью, чем между ненасыщенной С18:1 жирной кислотой и АСР. При избыточной экспрессии белка ClFATB1 в трансгенной форме табака наблюдалось повышение гидролитической тиоэстеразной активности неочищенных белковых экстрактов из листьев по отношению к С16:0-ACP и С18:0-ACP на 20 и 5,7% соответственно. Одновременно возрастало количество пальмитиновой и стеариновой кислот в листьях на 15,4 и 10,5% соответственно относительно нормы. Однако гетерологическая экспрессия этого рекомбинантного белка в трансгенной форме табака снижала тиоэстеразную активность неочищенных белковых экстрактов по отношению к С18:1-ACP на 12,7% в сравнении с нормой, а также уменьшала содержание ненасыщенных олеиновой, линолевой и линоленовой кислот в листьях этих растений. Таким образом, ClFATB1 мог бы выступить в качестве положительного регулятора накопления насыщенных и отрицательного регулятора продукции ненасыщенных жирных кислот, воздействуя на путь их синтеза в растениях.