БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 11, с. 1606–1616
УДК 577.2
Бактериальная и бесклеточная продукция фрагмента APP671–726, содержащего трансмембранный и металл-связывающий домены белка-предшественника бета-амилоида
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: предшественник бета-амилоида, трансмембранный домен, рекомбинантный белок, ЯМР-спектроскопия.
Аннотация
Более половины мутаций белка APP, обнаруженных при семейных формах болезни Альцгеймера, находится в его трансмембранном домене. Предполагают, что патогенные мутации влияют на структурно-динамические свойства трансмембранного домена APP, изменяя его конформационную стабильность и/или латеральную димеризацию. Несмотря на множество данных о патогенезе этой болезни, начальные этапы ее развития остаются неясными до настоящего времени. Для изучения молекулярных основ возникновения болезни Альцгеймера был выбран фрагмент APP671–726, содержащий трансмембранный и металл-связывающий домены, являющийся субстратом гамма-секретазного комплекса, аномальная активность которого приводит к образованию амилоидогенных фрагментов Aβ42. В настоящей работе впервые описаны высокоэффективная система бесклеточной продукции фрагмента APP671–726 и усовершенствованная система его бактериального синтеза. Оба метода позволяют получать миллиграммовые количества изотопно-меченого белка для структурных исследований методом гетероядерной спектроскопии ЯМР высокого разрешения.