БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 8, с. 1201–1209
УДК 577.152.313
Полифосфаты и экзополифосфатазная активность дрожжей Saccharomyces cerevisiae при сверхэкспрессии гомо- и гетерологичных генов PPN1
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: полифосфаты, экзополифосфатаза, ген PPN1, Saccharomyces cerevisiae, Acremonium chrysogenum, трансформация.
Аннотация
Для изучения роли экзополифосфатазы PPN1 в метаболизме неорганических полифосфатов у грибов получены штаммы Saccharomyces cerevisiae, трансформированные векторами экспрессии дрожжевого гена PPN1 и ортологичного ему гена PPN1 гриба Acremonium chrysogenum, продуцента цефалоспорина С. Экспрессия генов PPN1 в дрожжах осуществлялась под контролем сильного конститутивного промотора гена глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы S. cerevisiae в составе специализированного вектора PMB1. Векторами со встроенными генами PPN1 трансформировали штамм дрожжей с инактивированным геном PPN1. В результате у штамма, трансформированного вектором, содержащим дрожжевой ген PPN1, экзополифосфатазная активность увеличилась в 28 и 11 раз по сравнению с исходным мутантным и родительским штаммами, а содержание полифосфатов уменьшилось втрое. У штамма, трансформированного ортологом PPN1 из A. сhrysogenum, не обнаружено ни увеличения экзополифосфатазной активности, ни изменений содержания полифосфатов, что свидетельствует об отсутствии активной формы гетерологичного белка.