БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 5, с. 527–536
УДК 577.151.084,579.222
Сравнительный анализ протеома базидиального гриба Trametes hirsuta при культивировании на средах различного состава*
Институт биохимии им. А.Н. Баха
Поступила в редакцию 10.01.2013
После доработки 12.02.2013
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: биосинтез лакказы, протеомный анализ, внутриклеточные белки, двумерный электрофорез, Trametes hirsuta.
Аннотация
Методом дифференциальной протеомики проведен сравнительный анализ белковых профилей базидиального гриба Trametes hirsuta при росте на питательной среде без индуктора и с добавлением CuSO4. Разработанный протокол выделения и очистки внеклеточных и внутриклеточных белков мицелия позволил достичь глубокой экстракции белковых компонентов, одновременно удалив из образцов вещества, затрудняющие проведение двумерного электрофореза. Анализ секретомов базидиомицета показал изменения в качественном составе белкового профиля: при внесении индуктора количество продуцируемых изоформ и/или изоферментов лакказы возрастало с 7 до 11, а величина изменения их pI превысила 2 ед. Количество разделенных внутриклеточных белковых компонентов составило 552 и 502 для контрольной среды и среды с индуктором соответственно. В результате сравнительного анализа полученных белковых карт было выявлено пять регионов с максимальными отличиями белковых профилей. Идентификацию интересующих белков проводили посредством MALDI-TOF/TOF масс-спектрометрии с последующим пептидным фингерпринтом. Идентифицировано несколько внутриклеточных белков (β-субъединицы АТФ-синтазы, молекулярные шапероны, активатор шаперонов), продукция которых увеличивалась при внесении в культуральную среду индуктора, что свидетельствует об их участии в процессе регуляции биосинтеза лакказы.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM 13-006, 14.04.2013.
** Адресат для корреспонденции.