Способ выделения интактных молекул тайтина (коннектина) из сердечной мышцы млекопитающих^*

Аннотация

Для выделения тайтина из сердечной мышцы млекопитающих (кролика и суслика) был применен подход, с помощью которого ранее были получены миофибриллы с интактными полосами локализации минорных белков в А-диске саркомеров (Подлубная с соавт., 1989). Перед гомогенизацией мышечная ткань инкубировалась в течение 2–3-х недель при 4° в Ca²⁺-связывающем растворе для снижения активности Ca²⁺-зависимых протеаз. После гомогенизации мышцы тайтин выделяли по методу Сотериоу с соавт. (1993). В контрольных экспериментах выделение тайтина проводилось из мышечной ткани, которая не инкубировалась в Ca²⁺-связывающем растворе. В ряде случаев контрольные препараты тайтина содержали только T2-фрагменты, однако в большинстве случаев, наряду с T2, они содержали 5–20% его N2B-изоформы. С помощью нашего метода получены препараты тайтина сердечной мышцы кролика, которые, наряду с T2, содержали 30–50% N2B- и N2BA-изоформ этого белка. Обнаружено увеличение содержания α-структуры в препаратах тайтина, полученных этим методом. Выявлена более высокая ATPазная активность актомиозина in vitro в присутствии тайтина, препараты которого содержали больше интактных молекул. Этот результат подтверждает важную роль тайтина в регуляции актин-миозинового взаимодействия в мышце. Использованный в этой работе подход к сохранению тайтина может быть применен для выделения других белков, которые являются субстратами Ca²⁺-зависимых протеаз.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: