БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 3, с. 364–374
УДК 577.353.2
40 кДа-белок тонких нитей мидии изменяет конформацию Ф-актина в АТPазном цикле
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: кальпонино-подобный белок мидии, теневые волокна, аналоги АТP, промежуточные стадии актомиозина, конформационные изменения субфрагмента-1 миозина.
Аннотация
С помощью поляризационной флуориметрии в теневых мышечных волокнах исследовали влияние 40 кДа-белка тонких нитей мидии на те конформационные изменения Ф-актина, модифицированного флуоресцентным зондом 1,5-IAEDANS и FITC-фаллоидином, которые происходят при связывании субфрагмента-1 миозина (S1) как в отсутствие нуклеотидов, так и в присутствии MgADP или MgATP. Флуоресцентные зонды были жестко связаны с актином, делая диполи поглощения и излучения зонда чувствительными к изменению ориентации и подвижности мономера актина и его субдомена-1 в тонких нитях мышечного волокна. Показано, что при моделировании различных промежуточных состояний актомиозина ориентация и подвижность осцилляторов красителя изменяются дискретно, указывая на многоступенчатое изменение конформации актина в цикле гидролиза ATP. Установлено, что 40 кДа-белок оказывает влияние на ориентацию и подвижность флуоресцентных зондов, заметно подавляя изменения их ориентации в отсутствие нуклеотида и в присутствии MgADP, но усиливая эти изменения в присутствии MgATP. Предполагается, что 40 кДа-белок препятствует формированию сильной формы связывания миозина с актином в отсутствие нуклеотидов и в присутствии MgADP, но активирует формирование этой формы связывания в присутствии MgATP.