БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 1, с. 131–142
УДК 577.24
Гастрин-релизинг пептид человека стимулирует рост клеток гепатоцеллюлярной карциномы линии HepG2 путем блокирования апоптоза, вызванного стрессом эндоплазматического ретикулума
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гепатоцеллюлярная карцинома HepG2, гастрин-релизинг пептид, стресс эндоплазматического ретикулума, апоптоз.
Аннотация
Гастрин-релизинг пептид (GRP) – это нейропептид, играющий важную роль в регуляции роста различных раковых клеток человека. Однако мало что известно о взаимосвязи между GRP и апоптозом в клетках гепатоцеллюлярной карциномы человека. Настоящее исследование посвящено изучению влияния GRP на апоптоз, а также выяснению механизма стимуляции роста клеток HepG2 под действием GRP. Оценку воздействия GRP на пролиферацию клеток проводили путем анализа лактатдегидрогеназы (LDG). Детектирование GRP, каспазы 3 и 12 и протеина CHOP (проапоптотический белок, фактор транскрипции) в клетках HepG2 и HL-7702 проводили методом иммуноблоттинга; уровень транскрипции специфических мРНК, кодирующих белковые факторы стресса эндоплазматического ретикулума (ER-стресс), определяли методом обратной транскрипции и ПЦР (ОТ-ПЦР). Для выявления специфических особенностей механизма регуляции клеточного роста под действием GRP, мы исследовали пути передачи сигнала, приводящие к апоптозу. Было установлено, что при экспрессии GRP в клетках HL-7702 происходило ингибирование транскрипции специфических мРНК, кодирующих белковые факторы ER-стресса, такие как XBP1 (Х-бокс-связывающий протеин 1, фактор транскрипции), ATF4 (активирующий фактор транскрипции 4) и TRAF2 (ассоциированный с TNF рецептором фактор 2), индуцированных воздействием туникамицина. Кроме того, протеолиз и активации каспаз 3 и 12 и экспрессия CHOP белка также блокировались при экспрессии GRP в клетках HepG2 и HL-7702. Мы показали, что уровни экспрессии белковых факторов, таких как сплесненный XBP1, расщепленный ATF6, фосфоформа киназы IRE1-α и киназа PERK, фактор инициации трансляции eIF2-α, являющиеся ведущими компонентами трех путей клеточного ответа на ER-стресс (UPR реакция), существенно возрастали при обработке клеток HL-7702 туникамицином. Таким образом, GRP стимулирует рост клеток HepG2, блокируя ER-зависимый путь апоптоза.