БИОХИМИЯ, 2013, том 78, вып. 1, с. 66–72
УДК 577.112
Экспрессия, очистка и анализ вторичной структуры рекомбинантного белка KCTD1
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: KCTD1, круговой дихроизм, вторичная структура.
Аннотация
Белок KCTD1 содержит BTB-домен, способный облегчить белок–белковые взаимодействия, необходимые для регуляции сигнальных каскадов. В настоящей работе описана система экспрессии и очистки, позволяющая получить определенное количество рекомбинантного белка KCTD1 в клетках E. coli. кДНК, кодирующую KCTD1 человека, амплифицировали и клонировали в экспрессирующий вектор pET-30a(+). Рекомбинантный белок экспрессировали в клетках E. coli BL21(DE3) и очищали при помощи аффинной хроматографии. Данные масс-спектрометрического анализа, Вестерн-блот-анализа и анализа спектров кругового дихроизма свидетельствуют о том, что KCTD1 экспрессируется и правильно сворачивается. Оптимизация экспрессии белка KCTD1 и исследование его вторичной структуры позволит получить ценную информацию для дальнейших исследований структуры и функций KCTD1 и других белков семейства KCTD.