Рецептор-связывающий домен эфрина А1: получение в бактериальной системе экспрессии и активность

© 2012 О.В. Некрасова 1*, Г.В. Шаронов 1, Р.В. Тихонов 1, П.М. Колосов 3, М.В. Астапова 1, С.А. Якимов 1, А.И. Тагвей 1, А.А. Корчагина 2, О.В. Бочарова 1, А.Н. Вульфсон 1, А.В. Феофанов 1,2, М.П. Кирпичников 1,2

1 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

2 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет

3 Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

Поступила в редакцию 21.03.2012
После доработки 05.05.2012

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: эфрин А1, рецептор-связывающий домен, ренатурация, ВЭЖХ, эфриновый рецептор EphA2.

Аннотация

Эфриновые тирозин-киназные рецепторы (Eph-рецепторы) и их лиганды – эфрины, выполняют важную регуляторную функцию в процессах морфогенеза, а в ряде случаев участвуют и в злокачественной трансформации клеток. Эфрин А1, лиганд Eph-рецепторов А-класса, является модулятором роста и прогрессии опухолей, и механизм этой модуляции требует детального исследования. В настоящей статье мы докладываем о разработке системы бактериальной экспрессии рекомбинантного рецептор-связывающего домена эфрина А1 (eA1), способа его выделения и ренатурации с выходом целевого продукта около 50 мг/л культуры. Наличие специфической активности у eА1 подтверждено методами иммуноблоттинга, лазерной сканирующей конфокальной микроскопии и проточной цитометрии. Показано, что негликозилированный лиганд-связывающий домен эфрина А1 в мономерной форме способен активировать рецепторы EphA2 в клетках, стимулируя их фосфорилирование. Лиганд eA1 может быть использован для изучения особенностей взаимодействия эфрина А1 с различными Eph-рецепторами А-класса, а полученная генно-инженерная конструкция – для разработки более активных и избирательных лигандов и экспериментальных систем доставки цитотоксинов в опухолевые клетки, интенсивно экспрессирующие EphA2 или другие Eph-рецепторы А-класса.

Текст статьи

Сноски

* Адресат для корреспонденции.