Свойства рекомбинантной ATP-зависимой фруктокиназы галотолерантного метанотрофа Methylomicrobium alcaliphilum 20Z

Аннотация

В кластере генов синтеза и распада сахарозы у Methylomicrobium alcaliphilum 20Z обнаружен ген, продукт которого проявлял сходство с сахарокиназами семейства рибокиназ. Гетерологичной экспрессией этого гена в клетках Escherichia coli с последующей аффинной металл-хелатной хроматографией получен электрофоретически гомогенный препарат рекомбинантного белка с шестью остатками His на С-конце. Фермент катализировал ATP-зависимое фосфорилирование фруктозы до фруктозо-6-фосфата, но был неактивен с другими моносахаридами в качестве акцепторов фосфорильной группы. Фруктокиназа M. alcaliphilum 20Z наиболее активна в присутствии Mn²⁺ при рН 9,0 и 60°, ингибируется ADP (K_i = 2,50 ± 0,03 мМ). Кажущиеся константы Михаэлиса для фруктозы и ATP составляли 0,26 и 1,3 мМ соответственно, максимальная активность 141 Е/мг белка. По аминокислотной последовательности фермент проявлял наибольшее сходство с предполагаемыми фруктокиназами из метилотрофных и автотрофных протеобактерий, у которых ген fruK расположен в генном кластере, кодирующем ферменты синтеза сахарозы. Обсуждается связь фруктокиназы с метаболизмом сахарозы у M. alcaliphilum 20Z и других метанотрофов и автотрофов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: