Изучение взаимодействия миоглобина с митохондриями методом флуоресценции

Аннотация

Для характеристики взаимодействия миоглобина с митохондриями в процессе дезоксигенации оксимиоглобина в клетке изучено тушение разными лигандными миоглобинами собственной триптофановой и флавиновой флуоресценции митохондрий, а также флуоресценции встроенных в мембрану митохондрий флуоресцентных зондов 1,8-АНС и мероцианина 540 (М 540). В качестве тушителей использовали физиологически активный оксимиоглобин (MbО₂) и окисленный метмиоглобин (метMb), не способный связывать кислород. Отсутствие тушения флавиновой и триптофановой флуоресцении митохондрий при рН 6–8 означает, что миоглобин не контактирует с белками как внешней мембраны, так и электрон-транспортной цепи. Напротив, MbО₂ и метMb при рН 6–8 эффективно тушат флуоресценцию зондов 1,8-АНС и М 540. Параметры тушения эмиссии обоих зондов миоглобинами, степени тушения и константы связывания тушителя (K_m) очень близки и свидетельствуют о том, что зонды локализованы в фосфолипидных участках внешней мембраны и что миоглобин комплексируется именно с этими участками. Зависимость K_m от ионной силы доказывает важную роль кулоновских взаимодействий в образовании тушащего комплекса. Поскольку с изменением суммарного заряда молекулы миоглобина при рН 6–8 значения K_m не изменяются, зависимость от ионной силы должна быть обусловлена электростатическими взаимодействиями локального характера, в которых принимают участие полярные группы в определенной области белковой молекулы. Наиболее вероятными кандидатами на взаимодействие с анионными группами митохондриальных фосфолипидов являются инвариантные остатки лизина и аргинина в окружении гемовой полости миоглобина, состояние ионизации которых в исследованном интервале рН не изменяется.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: