БИОХИМИЯ, 2012, том 77, вып. 1, с. 79–89

УДК 577.112.017

Конструирование TNF-связывающих белков на основе домена фибронектина методом пересадки гипервариабельных участков антитела F10

© 2012 Л.Е. Петровская 1*, Л.Н. Шингарова 1, Е.А. Крюкова 1, Е.Ф. Болдырева 1, С.А. Якимов 1, С.В. Гурьянова 1, В.Н. Новоселецкий 2, Д.А. Долгих 1, М.П. Кирпичников 1,2

1 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

2 Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова

Поступила в редакцию 19.05.2011
После доработки 17.08.2011

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: фактор некроза опухолей, TNF-связывающие белки, домен фибронектина, пересадка CDR, ELISA, тест на цитотоксичность.

Аннотация

Фактор некроза опухолей (TNF) играет ключевую роль в патогенезе различных заболеваний. В целях изучения возможности конструирования TNF-связывающих белков методом пересадки гипервариабельных областей (CDR) иммуноглобулинов проведена замена аминокислотных последовательностей петель десятого домена фибронектина человека III типа (10Fn3) аминокислотными последовательностями CDR легкой и тяжелой цепей нейтрализующего TNF антитела F10. Исследование TNF-связывающих свойств полученных белков с помощью ELISA показало, что наиболее высокой активностью обладают Hd3, содержащий последовательности CDR-H1 и CDR-H2 антитела F10, и Hd2, содержащий последовательности CDR-H1 и CDR-H3. Сконструированные нами белки на основе домена фибронектина специфически связывают TNF в Вестерн-блоте, а также ослабляют его цитотоксическое действие на линию клеток L929. Наиболее высокую нейтрализующую активность демонстрируют белки Hd2 и Hd3, вызывающие соответственно 10- и 50-кратное повышение эффективной концентрации TNF, необходимой для 50%-ной гибели клеток.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции.