БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 11, с. 1556–1565
УДК 577.152.315
Особенности защитного действия MgADP и MgATP от ингибирования α3β3γ-субкомплекса βY341W-мутантной F1-ATPазы термофильной бактерии Bacillus PS3 7-хлор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом подтверждают двухцентровый механизм катализа
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ATP-синтаза, каталитическая кооперативность, двухцентровый катализ, многоцентровый катализ, связывание нуклеотидов.
Аннотация
Связывание MgADP и MgATP в каталитических центрах βY341W-α3β3γ-субкомплекса F1-ATPазы термофильной бактерии Bacillus PS3 оценивали по их влиянию на ингибирование фермента 7-хлор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом (NBD-Cl). В отсутствие активатора MgADP и MgATP защищают βY341W-α3β3γ-субкомплекс от ингибирования NBD-Cl путем связывания с двумя каталитическими центрами со сродством 37 мкM и 12 мМ и 46 мкM и 15 мМ соответственно. В присутствии активатора лаурилдиметиламин-N-оксида (LDAO) MgADP защищает βY341W-α3β3γ-субкомплекс от ингибирования NBD-Cl путем связывания в каталитическом центре с Kd = 12 мМ. В экспериментах по тушению флуоресценции βY341W-α3β3γ-субкомплекса связывание нуклеотидов в каталитическом центре со сродством в миллимолярной области концентраций ранее показано не было. В присутствии активаторов LDAO или селенита MgATP только частично защищает βY341W-α3β3γ-субкомплекс от ингибирования NBD-Cl, и фермент сохраняет чувствительность к ингибирующему действию NBD-Cl даже при концентрациях MgATP, которые являются насыщающими для ATPазной активности. Результаты свидетельствуют в пользу двухцентрового механизма катализа F1-ATPазами.