БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 10, с. 1407–1415
УДК 577.152.1
Сайт-направленный мутагенез остатков цистеина в люциферазе светляков Luciola mingrelica
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: люцифераза светляков, Luciola mingrelica, сайт-направленный мутагенез, остатки цистеина, полигистидиновая последовательность, кинетические параметры, термостабильность.
Аннотация
Методом сайт-направленного мутагенеза на основе плазмиды pETL7, кодирующей люциферазу светляков Luciola mingrelica со вставкой His6 на С-конце, получены мутантные формы люциферазы, несущие единичные (C62S, C62V, C86S, C146S, C164S), двойные (C62/146S, C62/164S, C86/146S и C146/164S), а также тройную замену С62/146/164S. Мутации не повлияли на спектры биолюминесценции и флуоресценции фермента. Для мутантов C86S, C86/146S, C62/164S и С62/146/164S величины KmATP и KmLH2 увеличились в 1,5–1,9 раза, заметно снизились уровень экспрессии, удельная активность и термостабильность фермента. Для остальных мутантов величины KmATP и KmLH2, удельная активность и уровень экспрессии не изменились. Термостабильность мутанта C146S увеличилась в ~2 и 1,3 раза при 37 и 42° соответственно. Обсуждается возможный механизм влияния данных мутаций на структуру и свойства фермента.