БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 7, с. 1016–1025
УДК 577.112.82; 579.842.23
Характеристика анти-ECA-антител в кроличьей антисыворотке против шероховатого штамма Yersinia enterocolitica O:3
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Yersinia enterocolitica O:3, общий энтеробактериальный антиген, липополисахарид, моновалентная антисыворотка.
Аннотация
Общий энтеробактериальный антиген (ECA) – характеристический поверхностный компонент бактерий семейства Enterobacteriaceae. Обычно он интегрирован во внешнюю мембрану за счет связи с фосфатидилглицерином (ECAPG). В то же время в некоторых особых случаях он связывается также с липополисахаридом (ECALPS), и эта форма иммунногенная. Yersinia enterocolitica O:3 экспрессирует как ECAPG, так и ECALPS. Для ответа на вопрос, регулируется ли ECA-иммуногенность Y. enterocolitica O:3 температурой, кроликов иммунизировали ECA-экспрессирующими бактериями Y. enterocolitica O:3, выращенными при 22 и 37°. В целях минимизации количества антител против ЛПС для иммунизации использовали штамм YeO3-c-trs8-R – мутант по ЛПС, лишенный как О-полисахарида, так и гексасахарида внешнего кора. Однако в полученных антисыворотках все еще присутствовало значительное количество антител, специфичных к кору ЛПС, что препятствовало детектированию реактивности ECA-специфичных антител. Для получения «моновалентных» антисывороток против ECA сыворотки абсорбировали ECA-отрицательными бактериями. Абсорбция живыми бактериями эффективно удаляла антитела против ЛПС, тогда как подвергнутые кипячению бактерии не давали такого эффекта. Вестерн-блоттинг показал, что моновалентная антисыворотка против ECA не реагирует с ECAPG и, следовательно, отличается по специфичности от моноклонального анти-ECA-антитела (mAb 898). Это позволило предположить, что в ECALPS Y. enterocolitica O:3 только одно или два повторяющихся звена ECA связаны с ЛПС. Найдено, что экспрессия как ECAPG, так и ECALPS регулируется температурой и супрессируется при 37°.