БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 6, с. 872–879
УДК 577.112.3
Получение и свойства рекомбинантного полиамин-связывающего белка PotD цианобактерий. Индукция PotD в клетках Synechocystis sp. PCC6803 под действием полиаминов
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цианобактерия Synechocystis sp. PCC6803, связывание полиаминов, индукция PotD, структурное моделирование.
Аннотация
Рекомбинантный полиамин-связывающий транспортный протеин D из цианобактерии Synechocystis sp. PCC6803 (rPotD), содержащий концевую последовательность из нескольких остатков His, был экспрессирован с высокой эффективностью в клетках Escherichia coli. Показано, что график связывания [14С]полиаминов с очищенным рекомбинантным белком rPotD имеет вид кривой с насыщением. Способность белка связывать различные полиамины уменьшалась в ряду спермидин ≥ спермин > путресцин (Kd = 7,8, 8,3 и 13,2 мкМ соответственно). Связывание полиаминов было максимальным при pH 8,0. Компьютерное моделирование структуры комплекса белок–лиганд, а также эксперименты по конкурентному ингибированию продемонстрировали, что полипептид PotD из Synechocystis специфически взаимодействовал со всеми тремя полиаминами. Структурные модели комплексов белка PotD из цианобактерий Synechocystis с путресцином и спермидином имели много общих черт с комплексами путресцин–PotF или спермидин–PotD из клеток E. coli соответственно. Добавление путресцина или спермидина в культуральную среду стимулировало повышение содержания белка PotD в клетках бактерий Synechocystis sp. Полученные данные свидетельствуют о том, что белок PotD опосредует транспорт полиаминов в клетках цианобактерии Synechocystis sp. PCC6803.