БИОХИМИЯ, 2011, том 76, вып. 6, с. 849–857
УДК 577.152.3
Выделение, первичная структура и свойства кислой фосфатазы из Euphorbia characias
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Euphorbia characias, кислая фосфатаза, пурпурная фосфатаза, металлоферменты, ионы железа, ионы цинка.
Аннотация
Пурпурная кислая фосфатаза из млечного сока молочая Euphorbia characias была очищена до гомогенного состояния. Нативный фермент имел молекулярную массу 130 кДа и состоял из двух идентичных субъединиц, соединенных дисульфидным мостиком. Каждая субъединица содержала 1 ион Fe(III) и 1 ион Zn(II). Спектр поглощения фосфатазы характеризовался присутствием второго максимума при длине волны 540 нм. Наличие этого максимума обусловливало пурпурную окраску белка и связано с образованием комплекса с переносом заряда между Tyr172 и координированным с ним ионом железа. Открытую рамку считывания размером 1392 п.о. (пары оснований) содержала кДНК фосфатазы и кодировала белок, состоящий из 463 а.о. (аминокислотных остатков) и имеющий 92–99% гомологии с пурпурными кислыми фосфатазами из других высших растений. Фермент катализировал гидролиз р-нитрофенилфосфата, являющегося типичным модельным субстратом для фосфатаз, а также гидролиз ряда природных соединений, таких как ATP, АDP, глюкозо-6-фосфат, фосфоенолпируват. Активность фермента была максимальной при pH 5,75 и снижалась под действием типичных ингибиторов кислых фосфатаз: молибдата, ванадата и Zn2+.